Bst 2.0 DNA پولىمېراسى (گلىتسېرىن ھەقسىز)
Bst DNA پولىمېرازا V2 Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I دىن ھاسىل قىلىنغان ، ئۇنىڭ 5 ′ → 3 ′ DNA پولىمېرازا پائالىيىتى ۋە كۈچلۈك زەنجىرنى ئالماشتۇرۇش پائالىيىتى بار ، ئەمما 5 ′ → 3 ′ تاشقى كۆرۈنۈش پائالىيىتى يوق.Bst DNA Polymerase V2 بەلۋاغنىڭ يۆتكىلىشى ، ئىسسىقلىقنىڭ كۈچەيتىلىشى LAMP (Loop ۋاسىتىلىك ئىسسىقلىق بىلەن كۈچەيتىش) ۋە تېز تەرتىپكە ماس كېلىدۇ.
زاپچاسلار
| زاپچاس | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (گلىتسېرىنسىز) (8U / μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 mL |
قوللىنىشچان پروگراممىلار
1.LAMP ئىسسىقلىق بىلەن كۈچەيتىش
2.DNA تاق تاق كۆچۈش رېئاكسىيەسى
3. يۇقىرى GC گېن تەرتىپى
4. نانوگرامما سەۋىيىسىنىڭ DNA تەرتىپى.
ساقلاش ھالىتى
0 سېلسىيە گرادۇستىن تۆۋەن توشۇش -25 ° C ~ -15 ° C قا ساقلىنىدۇ.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر ئورۇن 30 سېلسىيە گرادۇسلۇق 30 مىنۇتتا 25 nmol dNTP نى كىسلاتادا ئېرىمەس ماتېرىيالغا ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.
سۈپەت كونترول
1.ئاقسىلنىڭ ساپلىقى (SDS-PAGE):Bst DNA پولىمېرازا V2 نىڭ ساپلىقى% 99 ≥ SDS-PAGE تەھلىلى ئارقىلىق Coomassie كۆك بايقاش ئارقىلىق بەلگىلىنىدۇ.
2.Exonuclease Activity:ئەڭ تۆۋەن بولغاندا 8 U لىك Bst DNA پولىمېرازا V2 بولغان 1 μg λ -Hind Ⅲ ھەزىم قىلىش DNA سىنى 37 سائەت 37 دە ئۆز ئىچىگە ئالغان 50 μL رېئاكسىيەنىڭ ئىنكاسى ئېنىقلانغاندەك ئېنىقلىغىلى بولمايدىغان ناچارلىشىشنى كەلتۈرۈپ چىقارمايدۇ.
3.Nickase Activity:ئەڭ تۆۋەن بولغاندا 8 U Bst DNA پولىمېرازا V2 بولغان 1 μg pBR322 DNA بىلەن 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 16 سائەت ئىچىدە 50 μL رېئاكسىيەنىڭ ئىنكاسى ئېنىقلانغاندەك بايقىغىلى بولمايدىغان ناچارلىشىشنى كەلتۈرۈپ چىقارمايدۇ.
4.RNase پائالىيىتى:ئەڭ تۆۋەن بولغاندا 8 U لىك Bst DNA پولىمېراسى V2 بولغان 1.6 mgg MS2 RNA بىلەن 16 سېلسىيە گرادۇسلۇق 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىنكاسى 50 سېلسىيە گرادۇس.
5.E. coli DNA:120 U Bst DNA پولىمېرازا V2 نىڭ E. coli 16S rRNA چېكەتكىسىگە خاس بولغان دەسلەپكى TaqMan qPCR ئارقىلىق E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ بار-يوقلۇقى تەكشۈرۈلگەن.E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ DNA بۇلغىنىشى ≤1 كۆپەيتىلگەن.
LAMP Reaction
| زاپچاسلار | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (ھەر بىرى 10mM) | 3.5 μL |
| SYTO ™ 16 يېشىل (25 ×)a | 1.0 μL |
| Primer mixb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (گلىتسېرىنسىز) (8 U / uL) | 1 μL |
| قېلىپ | × μL |
| ddH₂O | 25 μL |
ئىزاھات:
1) a.SYTOTM 16 يېشىل (25 ×): تەجرىبە ئېھتىياجىغا ئاساسەن ، باشقا بوياقلارنى ئالماشتۇرۇش ئورنىدا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
2) b.دەسلەپكى ئارىلاشتۇرۇش: 20 µ M FIP ، 20 µ M BIP ، 2.5 µ M F3 ، 2.5 µ M B3 ، 5 µ M LF ، 5 µ M LB ۋە باشقا توملارنى ئارىلاشتۇرۇش ئارقىلىق ئېرىشىلگەن.
ئىنكاس ۋە شەرت
1 × HC Bst V2 Buffer ، يوشۇرۇن تېمپېراتۇرا ° C 60 تىن ° C 65 ئارىلىقىدا.
Heat Inactivation
80 ° C ， 20 مىنۇت
