DNase I.
DNase I (Deoxyribonuclease I) بولسا بىر ياكى قوش يۆنىلىشلىك DNA نى ھەزىم قىلالايدىغان ئىچكى ئاجراتما ئوكسىد.ئۇ فوسفودىستېر باغلىنىشىنى تونۇپ ۋە يېپىپ ، 5′-تېرمىنالدىكى فوسفات گۇرۇپپىسى بىلەن يەككە ياكى قوش يۆنىلىشلىك ئولىگودوكسىنوكلېئوتىد ۋە 3 ′ تېرمىنالدىكى گىدروكسىل ھاسىل قىلىدۇ.DNase I نىڭ پائالىيىتى Ca2 + گە باغلىق بولۇپ ، Mn2 + ۋە Zn2 + غا ئوخشاش مېتال ئىئونلار ئارقىلىق قوزغىتىشقا بولىدۇ.5mM Ca2 + ئېنزىمنى گىدرولىزدىن ساقلايدۇ.Mg2 + نىڭ ئالدىدا ، ئېنزىم ئىختىيارىي ھالدا ھەر قانداق تور بېكەتنى DNA نىڭ ھەر قانداق بىر يېرىگە چاپلىيالايدۇ.Mn2 + نىڭ ئالدىدا ، DNA نىڭ قوش لىنىيىسىنى بىرلا ۋاقىتتا تونۇغىلى ۋە ئوخشاش بىر جايدا دېگۈدەك يېپىپ ، تەكشى ئۇچىدىكى DNA پارچىلىرى ياكى يېپىشقاق ئۇچىدىكى DNA پارچىلىرىنى ھاسىل قىلىپ ، 1-2 يادرو ھاسىل بولىدۇ.
مەھسۇلات مۈلكى
كالا ئاشقازان ئاستى بېزى DNase I ئېچىتقۇ ئىپادىلەش سىستېمىسىدا ئىپادىلىنىپ پاكلاندى.
Component
| زاپچاس | ھەجىم | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10 × DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
قاتناش ۋە ساقلاش
1. ساقلاش مۇقىملىقى: - ساقلاش ئۈچۈن 15 ℃ ~ -25;;
2. تىرانسپورت مۇقىملىقى: مۇز خالتىسى ئاستىدا توشۇش
3. تەمىنلەنگەن: 10 mM Tris-HCl ، 2 mM CaCl2،% 50 گلىتسېرىن ، pH 7.6 25 at.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن بولۇپ ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 10 مىنۇتتا 1 µg pBR322 DNA نى پۈتۈنلەي تۆۋەنلىتىدۇ.
سۈپەت كونترول
RNase:5U DNase I نىڭ 1.6 mgg MS2 RNA بىلەن 4 سائەت 37 at 4 سائەتتە ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى تەرىپىدىن بېكىتىلگەندەك تۆۋەنلەش بولمايدۇ.
باكتېرىيە Endotoxin:LAL- سىناق ، جۇڭگونىڭ Pharmacopoeia IV 2020 نەشرىگە ئاساسەن ، گېلى چەكلەش ئۇسۇلى ، ئومۇمىي قائىدە (1143).باكتېرىيەنىڭ ئىچكى ئاجراتما مىقدارى EU10 EU / mg بولۇشى كېرەك.
ئىشلىتىش قوللانمىسى
1. تۆۋەندە كۆرسىتىلگەن نىسبەت بويىچە RNase ھەقسىز تۇرۇبىدىكى ئىنكاس ھەل قىلىش چارىسىنى تەييارلاڭ:
| زاپچاس | ھەجىم |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-free (5U / μL) | ھەر Ug RNA غا 1 U. |
| ddH2O | 10 μL |
2.37 15 15 مىنۇت;
3. ئاخىرلاشتۇرغۇچ بۇففېرنى قوشۇپ ئىنكاسنى توختىتىڭ ، 65 at دە 10 مىنۇت قىزىتىپ DNase I نى قوزغىتىڭ. بۇ ئەۋرىشكىنى كېيىنكى قېتىملىق كۆچۈرۈش تەجرىبىسىگە بىۋاسىتە ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
ئىزاھات
1. RNA نىڭ ھەر mgg 1U DNase نى ئىشلىتىڭ ، ياكى RNA نىڭ 1μg دىن تۆۋەن بولغان 1U DNase I نى ئىشلىتىڭ.
2.EDTA نى ئەڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 5MM غا قوشۇپ ، RNA نىڭ ئېنزىم ئاكتىپلاش جەريانىدا بۇزۇلۇشىدىن ساقلاش كېرەك.
