PNGase F.
پېپتىد- N-Glycosidase F (PNGase F) گلىكوپروتىندىن N ئۇلانغان ئولىگوساخارىدلارنىڭ ھەممىسىنى دېگۈدەك چىقىرىپ تاشلاشتىكى ئەڭ ئۈنۈملۈك فېرمېنتلىق ئۇسۇل.PNGase F بولسا بىر خىل ئامازا بولۇپ ، ئۇ N بىلەن مۇناسىۋەتلىك گلىكوپروتىننىڭ يۇقىرى ماننو ، ئارىلاشما ۋە مۇرەككەپ ئولىگوساخارىدلارنىڭ ئىچكى قىسمىدىكى GlcNAc بىلەن ئاسپراگىن قالدۇقىنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
ئىلتىماس
بۇ خىل ئېنزىم كاربون سۇ بىرىكمىلىرىنى ئاقسىلدىن چىقىرىۋېتىشكە پايدىلىق.
تەييارلىق ۋە ئۆلچەم
| كۆرۈنۈش | رەڭسىز سۇيۇقلۇق |
| ئاقسىلنىڭ ساپلىقى | ≥95% (SDS-PAGE دىن) |
| پائالىيەت | 500،000 U / mL |
| Exoglycosidase | ھېچقانداق پائالىيەت بايقالمىدى (ND) |
| Endoglycosidase F1 | ND |
| Endoglycosidase F2 | ND |
| Endoglycosidase F3 | ND |
| Endoglycosidase H. | ND |
| Protease | ND |
خاسلىقى
| EC نومۇرى | 3.5.1.52(مىكرو ئورگانىزمدىن قايتا ھاسىل بولىدۇ) |
| مولېكۇلا ئېغىرلىقى | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric point | 8. 14 |
| ئەڭ ياخشى pH | 7.0-8.0 |
| ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا | 65 ° C. |
| ئېنىقلىق دەرىجىسى | GlcNAc بىلەن ئاسپراگىن قالدۇقلىرى ئارىسىدىكى گلىكوزىدلىق باغلىنىشنى تازىلاش 1-رەسىم |
| تونۇش تور بېكەتلىرى | N ئۇلانغان گلىكانلار α1-3 فۇكۇزا بولمىسا 2-رەسىم |
| ئاكتىپلىغۇچىلار | DTT |
| Inhibitor | SDS |
| ساقلاش تېمپېراتۇرىسى | -25 ~ -15 ℃ |
| Heat Inactivation | تەركىبىدە 1µL PNGase F بولغان 20µL رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى 75 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھالەتتە 10 مىنۇت ئاكتىپسىزلىنىدۇ. |
رەسىم 1 PNGase F نىڭ تارماق ئالاھىدىلىكى
2-رەسىم PNGase F.
ئىچكى GlcNAc قالدۇقلىرى α1-3 فوكۇسقا ئۇلانغاندا ، PNGase F گلىكوپروتىندىن N ئۇلانغان ئولىگوساخارىدنى تازىلىۋېتەلمەيدۇ.بۇ ئۆزگەرتىش ئۆسۈملۈكلەر ۋە بەزى ھاشارات گلىكوپروتىنلاردا كۆپ ئۇچرايدۇ.
Component
|
| زاپچاسلار | مەركەزلىشىش |
| 1 | PNGase F. | 50 µl |
| 2 | 10 × گلىكوپروتىننى يوقىتىش بۇففېر | 1000 µl |
| 3 | 10 × GlycoBuffer 2 | 1000 µl |
| 4 | 10% NP-40 | 1000 µl |
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك (U) 10 µg دىن تۆۋەن بولغان RNase B دىن% 95 كاربون سۇ بىرىكمىسىنى چىقىرىۋېتىشكە ئېھتىياجلىق فېرمېنتنىڭ مىقدارى بولۇپ ، ئومۇمىي ئىنكاس مىقدارى 10 µL.
ئىنكاس شارائىتى
1. گىلوكوپروتىننى 1-20 µg ئېرىتىپ ، دىئونلانغان سۇ بىلەن ئېرىتىپ ، 1 µl 10 × گلىكوپروتىن دېناتلاشتۇرۇش بۇففېر ۋە H2O (زۆرۈر تېپىلغاندا) قوشۇپ ، 10 µl ئومۇمىي ئىنكاس مىقدارىنى ھاسىل قىلىڭ.
2.100 سېلسىيە گرادۇستا 10 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ ، مۇزدا سوۋۇتىڭ.
3.2 µl 10 × GlycoBuffer 2 ، 2 µl 10% NP-40 نى ئارىلاشتۇرۇڭ.
4.1-2 µl PNGase F ۋە H نى قوشۇڭ2O (زۆرۈر تېپىلغاندا) 20 µl ئومۇمىي رېئاكسىيە مىقدارىنى ھاسىل قىلىپ ئارىلاشتۇرۇڭ.
5.37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىنكاسى 60 مىنۇت.
6.SDS-PAGE تەھلىلى ياكى HPLC تەھلىلى ئۈچۈن.
