UDG / UNG ئېنزىم
UDG (سۈيدۈك ئاجرىتىش سىستېمىسى DNA گلىكوسىلازا) ssDNA بىلەن dsDNA دىكى سۈيدۈك يولى بازىسى بىلەن شېكەر-فوسفات ئومۇرتقىسى ئوتتۇرىسىدىكى N- گلىكوزىد ئۇلىنىشىنىڭ گىدرولىزلىنىشىنى قوزغىتالايدۇ.ئۇ ئاسانلا ئايرۇدولنىڭ بۇلغىنىشىنى كونترول قىلالايدۇ ھەمدە PCR ، qPCR ، RT-qPCR ۋە LAMP قاتارلىق كۆپ ئۇچرايدىغان مولېكۇلا بىئولوگىيە سىستېمىسىغا ماس كېلىدۇ.
ئۆلچىمى
| ئىپادىلەش رىياسەتچىسى | قايتا ھاسىل قىلغۇچى E. coliwith uracil DNA گلىكوسىلازا گېنى |
| مولېكۇلا ئېغىرلىقى | 24. 8kDa |
| ساپلىق | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Heat Inactivation | 95 ℃ ، 5 ~ 10 مىنۇت |
| بىرلىك ئېنىقلىمىسى | بىر بىرلىك (U) 25 μ at دە 30 مىنۇتتا l μg dU تەركىبىدىكى dsDNA نىڭ گىدرولىزنى كاتالىزاتورلۇق قىلىشقا ئېھتىياجلىق ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن. |
ساقلاش
بۇ مەھسۇلاتنى 25 ℃ ~ -15 ° C قا ئىككى يىل ساقلاش كېرەك.
كۆرسەتمە
1.تۆۋەندىكى سىستېمىغا ئاساسەن PCR ئىنكاس ئارىلاشمىسىنى تەييارلاش
| زاپچاسلار | ھەجىمى (μL) | ئاخىرقى مەركەزلىشىش |
| 10 × PCR Buffer (Mg² + Plus) | 5 | 1 × |
| 25 mmol / LMgCl | 3 | 1.5 mmol / L. |
| dUTP (10 mmol / L) | 3 | 0.6 mmol / L. |
| dCTP / dGTP / dATP / dTTP (10mmol / Leach) | 1 | 0.2 mmol / Leach |
| قېلىپ DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol / L) | 2 | 0.4 μ mmol / L. |
| Primer 2 (10μmol / L) | 2 | 0.4 μ mmol / L. |
| تاق DNA پولىمېراسى (5 U / μL) | 0. 5 | 0. 05 U / μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG / UNG) ، 1 U / μL | 1 | 1 U / μL |
| ddH₂O | 50 كە قەدەر | - |
ئەسكەرتىش: تەجرىبە تەلىپىگە ئاساسەن ، DUTP نىڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 0.2-0.6 mmol / L ئارىلىقىدا تەڭشىلىدۇ ، 0.2 mmol / L dTTP نى تاللاشقا بولىدۇ.
2.كېڭەيتىش تەرتىپى
| دەۋرىيلىك قەدەم | تېمپېراتۇرا | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت |
| dU بار قېلىپنىڭ تۆۋەنلىشى | 25 ℃ | 10 مىنۇت | 1 |
| UDG ئاكتىپلاش ، قېلىپ دەسلەپكى ئايرىش | 95 ℃ | 5 ~ 10 مىنۇت | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10 سېكۇنت |
30-35 |
| Annealing | 60 ℃ | 20 سېكۇنت | |
| كېڭەيتىش | 72 ℃ | 30sec / kb | |
| ئاخىرقى كېڭەيتىش | 72 ℃ | 5 min | 1 |
ئەسكەرتىش: 25 سېلسىيە گرادۇسلۇق رېئاكسىيە ۋاقتىنى تەجرىبە تەلىپىگە ئاساسەن 5-10 مىنۇت ئىچىدە تەڭشىگىلى بولىدۇ.
ئىزاھات
1.UDG كۆپىنچە PCR ئىنكاس قايتۇرغۇچلىرىدا ئاكتىپ.
2.فېرمېنتنى ئىشلەتكەندە مۇز ساندۇقىدا ياكى مۇز مۇنچىسىدا ساقلاش ، ئىشلىتىشتىن كېيىنلا ° C20- دە ساقلاش كېرەك.
3.ساغلاملىقىڭىز ۋە بىخەتەرلىكىڭىزگە كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن كېرەكلىك PPE ، تەجرىبىخانا چاپان ۋە پەلەي كىيىڭ!
