DNA ئېلىش Mini Kit
بۇ يۈرۈشلۈك ئەلالاشتۇرۇلغان بۇففېر سىستېمىسى ۋە سىلىتسىي گېلى تۈۋرۈكىنى ساپلاشتۇرۇش تېخنىكىسىنى قوللانغان بولۇپ ، TAE ياكى TBE ئاگاروزا گېلىنىڭ ھەر خىل قويۇقلۇقىدىن 70 bp - 20 kb لىق DNA پارچىلىرىنى ئەسلىگە كەلتۈرگىلى بولىدۇ.DNA سۈمۈرۈلۈش تۈۋرۈكى يۇقىرى تۇزلۇق شارائىتتا DNA نى ئالاھىدە سۈمۈرەلەيدۇ.بۇنىڭدىن باشقا ، بۇ زاپچاس PCR مەھسۇلاتلىرى ، فېرمېنتلىق رېئاكسىيە سىستېمىسى ياكى باشقا ئۇسۇللار ئارقىلىق ئېرىشكەن خام DNA مەھسۇلاتلىرىدىكى DNA پارچىلىرىنى بىۋاسىتە ساپلاشتۇرالايدۇ ۋە ئاقسىل ، باشقا ئورگانىك بىرىكمىلەر ، ئانئورگانىك تۇز ئىئونى ۋە ئولىگونۇكلېئوتىد پىرىمى قاتارلىق بۇلغانمىلارنى چىقىرىپ تاشلىيالايدۇ.ئۇ 10-15 مىنۇت ئىچىدە تازىلاشنىڭ تاماملىنىشىغا كاپالەتلىك قىلالايدۇ.ساپلاشتۇرۇلغان DNA نى بىۋاسىتە كۆچۈرۈش ، ئۆزگەرتىش ، ئېنزىم ھەزىم قىلىش ، ۋىرۇس كۆچۈرۈش ، PCR ، تەرتىپلەش ، مىكرو ئوكۇل سېلىش قاتارلىقلارغا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
ساقلاش شارائىتى
-15 ~ -25 at دە ساقلاڭ ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا توشۇڭ.
زاپچاسلار
| زاپچاسلار | (100 rxns) |
| Buffer GDP | 80 مىللىمېتىر |
| Buffer GW | 2 × 20 ml |
| Elution Buffer | 20 مىللىلېتىر |
| FastPure DNA Mini Columns-G | 100 |
Buffer GDP:DNA باغلىغۇچ.
Buffer GW:يۇيۇش سۇيۇقلۇقىئىشلىتىشتىن بۇرۇن بوتۇلكىغا كۆرسىتىلگەن ھەجىمگە مۇتلەق ئېتانول قوشۇڭ.
Elution Buffer:Elution.
FastPure DNA Mini Columns-G:DNA قوبۇل قىلىش ستونلىرى.
Collection Tubes 2 ml:سۈزگۈچ ئۈچۈن يىغىش تۇرۇبىسى.
تەييار ماتېرىياللار
1.5 مىللىلىتىر سۈمۈرۈلگەن تۇرۇبا ، مۇتلەق ئېتانول ۋە ئىزوپروپولول (DNA پارچىسى ≤100 bp بولغاندا ، 1 توم قوشۇڭ)
ئىزوپروپانولدىن 1 توملۇق گېلى) ، سۇ مۇنچىسى.
تەجرىبە جەريانى
80 مىللىلېتىر ئېتانول قوشۇپ ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن بەلگە كۆرسىتىلگەندەك Buffer GW نى سۇيۇلدۇرۇڭ ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ساقلاڭ.
مېخانىزم
1. PCR رېئاكسىيە ھەل قىلىش چارىسى
گېل ئېلىش لايىھىسى: ئوخشاش ھەجىمدىكى Buffer GDP PCR رېئاكسىيە ھەل قىلىش لايىھىسىنى قوشۇڭ:بۇففېرنىڭ ئاۋازىنىڭ 5 ھەسسىسىنى قوشۇڭ
2. GDP گېلىنىڭ مىقدارىنى ھېسابلاڭ (100) μl 100 mg غا تەڭ)
گېلىنى ئېرىتىش
3. 50 ~ 55 دە قىزىتىڭ℃
4. Bind Wash
300 μL Buffer GDP نى قوشۇڭ *
700 μL Buffer GW نى قوشۇڭ
700 μL Buffer GW نى قوشۇڭ
5. Elute
20 - 30μL Elution Buffer ياكى دىئونلانغان سۇنى قوشۇڭ
ئىزاھات * PCR رېئاكسىيە سۇيۇقلۇقىنىڭ ئەسلىگە كېلىشى
گېل ئېلىش پروگراممىسى
1. DNA پارچىلىرىنى پارچىلاش ئۈچۈن DNA ئېلېكتروفورېزىيىسىدىن كېيىن ، ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ ئاستىدىكى ئاگاروزا گېلىدىن DNA پارچىسىنى قېزىڭ.سۈمۈرگۈچ قەغەز ئىشلىتىپ گېلىنىڭ كۆرۈنەرلىك نەملىكىنى سۈمۈرۈپ ، ئامال بار ئارتۇق ئاگاروزا ئېلىۋېتىش ئارقىلىق گېلى پارچىسىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنى ئازايتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.ئۇنىڭ مىقدارىنى ھېسابلاش ئۈچۈن گېلى پارچىسىنى (مىكرو ئېلېمېنتلىق نەيچىسىز) ئۆلچەڭ: زىچلىقى 1g / ml دەپ پەرەز قىلساق ، 100 مىللىگىرام گېلىسنىڭ مىقدارى تەخمىنەن 100 مىللىمېتىر.
2. باراۋەر ھەجىمدىكى بۇففېر GDP نى قوشۇڭ ، 50 ~ 55 at دە 7-10 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ (گېلىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىگە ئاساسەن ، يوشۇرۇن ۋاقىتنى گېلى پۈتۈنلەي ئېرىپ بولغۇچە تەڭشەڭ).يوشۇرۇن ھالەتتە تۇرۇبىنى 2 قېتىم ئايلاندۇرۇڭ.
Buffer GDP نىڭ 1-3 تومىنى قوشقاندا DNA ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىگە تەسىر كۆرسەتمەيدۇ.ئەگەر ئەسلىگە كەلتۈرىدىغان DNA پارچىسى <100 bp بولسا ، بۇففېر GDP نىڭ 3 تومىنى قوشۇش كېرەكگېلى پارچىلىرى پۈتۈنلەي ئېرىپ كەتكەندىن كېيىن ، 1 توم ئىزوپروپانول قوشۇپ ئوبدان ئارىلاشتۇرۇڭ ، ئاندىن كېيىنكى باسقۇچقا داۋاملاشتۇرۇڭ.
3. Centrifuge قىسقا ۋاقىت ئىچىدە ئەۋرىشكىنى نەيچىنىڭ ئاستىغا ئەكېلىپ ، FastPure DNA Mini Columns-G نى يىغىش تۇرۇبىسىغا 2 مىللىلېتىر قىستۇرۇپ ، ھەل قىلىش چارىسىنى ئەستايىدىللىق بىلەن ئەڭ يۇقىرى بولغاندا 700 مىللىمېتىردىن بىر قېتىم يۆتكەڭ.
سۈزۈش تۈۋرۈكىگە ۋاقىت ، مەركەزدىن قاچۇرۇش ۋاقتى 12000 rpm (13،800 X g) 30-60 سېكۇنت.
4. سۈزگۈچنى تاشلىۋېتىپ ، 300 μL Buffer GDP نى كوللىكتىپقا قوشۇڭ ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 1 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ ، 12000 rpm (13,800 X g) 30-60 سېكۇنت.
5. سۈزگۈچنى تاشلىۋېتىپ ، 700 μL Buffer GW نى قوشۇڭ (مۇتلەق ئېتانولنىڭ ئالدىن قوشۇلغان-قوشۇلمىغانلىقىنى تەكشۈرۈڭ!) ، مەركەزگە 12000 rpm (13 مىڭ 800 g) 30-60 سېكۇنت.
Ad بۇففېر GW نى سۈمۈرۈلۈش تۈۋرۈكىنىڭ تېمىغا قوشۇڭ ياكى بۇففېر GW ئارقا مۇقاۋىسىنى قوشۇپ 2 - 3 قېتىم تەتۈر ئارىلاشتۇرۇپ ، تۇرۇبا تېمىغا چاپلانغان تۇزنى تولۇق يۇيۇشقا ياردەم قىلىڭ.
6. 5-قەدەمنى تەكرارلاڭ.
Buff Buffer GW بىلەن ئىككى قېتىم يۇيۇش تۇزنىڭ پۈتۈنلەي چىقىرىۋېتىلىشىگە كاپالەتلىك قىلىپ ، كېيىنكى تەجرىبىلەرگە بولغان تەسىرىنى يوقىتىدۇ.
7. سۈزگۈچنى تاشلاپ ، 12000 rpm (13،800 X g) دىكى قۇرۇق ئىستوننى 2 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
8. تۈۋرۈكنى 1.5 مىللىمېتىرلىق مىكرو ئېلېمېنت نەيچىسىگە سېلىڭ ، 20 ~ 30 مىللىمېتىرلىق Elution Buffer نى تۈۋرۈك پەردىسىنىڭ مەركىزىگە قوشۇڭ ، 2 مىنۇت سىڭدۈرۈڭ ، ئاندىن 12000 rpm (13،800 X g) دە 1 مىنۇت.ستوننى تاشلاڭ ، ئېرىشكەن DNA نى -20 دە ساقلاڭ.
8 8-قەدەمدىكى خاسىيەتلىك ماددىنى ستونغا يۆتكەپ ، يەنە بىر قېتىم سايلاش ۋە Elution Buffer نى 55 گە يەتكۈزۈش (DNA پارچىسى> 3 kb بولغاندا) ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇشقا ياردىمى بولۇشى مۇمكىن.
PCR مەھسۇلاتلىرىنى ئەسلىگە كەلتۈرۈش پروگراممىسى
بۇ كېلىشىم PCR مەھسۇلاتلىرى ، فېرمېنتلىق ئىنكاس سىستېمىسى ۋە باشقا DNA خام مەھسۇلاتلىرىدىن (گېن DNA نى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ) DNA پارچىلىرىنى تازىلاشقا ئىشلىتىلىدۇ.بۇ ھەل قىلىش چارىسى ھەر خىل يادرو ، پىرىمېر ، دەسلەپكى ۋاقىت ئۆلچىمى ، تۇز مولېكۇلاسى ، فېرمېنت ۋە باشقا بۇلغانمىلارنى ئۈنۈملۈك يوقىتالايدۇ.
1. PCR مەھسۇلاتلىرى ، فېرمېنتلىق رېئاكسىيە ھەل قىلىش چارىسى ۋە باشقا DNA خام مەھسۇلاتلىرى.ئۇلارنىڭ مىقدارىنى تۇرۇبا بىلەن مۆلچەرلەپ ، مىكروبسىزلاندۇرۇلغان 1.5 مىللىمېتىر ياكى 2 مىللىمېتىر تۇرۇبىغا يۆتكەڭ.ئاۋازى 100 μL غا قەدەر ddH2O نى قوشۇڭ.يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى گېن گۇرۇپپىسىغا كەلسەك ، ddH2O بىلەن 300 μL غىچە سۇيۇلسا ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇشقا پايدىسى بار.
2. بۇففېر GDP نىڭ 5 تومىنى قوشۇڭ ، تەتۈر ئايلىنىش ياكى قاينام-تاشقىنلىق بىلەن ئوبدان ئارىلاشتۇرۇڭ.ئەگەر DNA نىڭ قىزىقىشى> 100 bp بولسا ، ئېتانولنىڭ 1.5 توم (ئەۋرىشكە + بۇفېر GDP) نى قوشۇش كېرەك.
3. تۈۋرۈكنى يىغىش نەيچىسىگە قايتا قىستۇرۇپ ، ئارىلاشما ماددىنى ستونغا يۆتكەڭ ، 12000 rpm (13،800 × g) دە 30 - 60 سېكۇنت.ئەگەر ئارىلاشما ئېرىتمىنىڭ ھەجىمى> 700 µL بولسا ، سۈمۈرۈلۈش تۈۋرۈكىنى يىغىپ ساقلاش تۇرۇبىسىغا قايتا قويۇڭ ، قالغان ھەل قىلىش چارىسىنى سۈمۈرۈلۈش تۈۋرۈكىگە يۆتكەڭ ، مەركەزدىن قاچۇرۇش ۋاقتى 12000 rpm (13،800 × g) 30 - 60 سېكۇنت.
4. كېيىنكى ئىقتىدار 08- 1 / گېل ئېلىش پروگراممىسىنىڭ 5 - 8 باسقۇچلىرىنى كۆرسىتىدۇ.
قوللىنىشچان پروگراممىلار
TAE ياكى TBE ئاگاروزا گېلىنىڭ ھەر خىل قويۇقلۇقىPCR مەھسۇلاتلىرى ، فېرمېنتلىق ئىنكاس سىستېمىسى ياكى ھەر خىل ئۇسۇللار ئارقىلىق ئېرىشكەن باشقا خام DNA مەھسۇلاتلىرى.ئەسلىگە كەلتۈرۈلگەن پارچىلار70 bp -20 kb.
ئىزاھات
پەقەت تەتقىقات ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.دىئاگنوز قويۇش تەرتىپىدە ئىشلىتىشكە بولمايدۇ.
1. بۇففېر GW نى ئىشلىتىشتىن بۇرۇن 80 مىللىلېتىر ئېتانول قوشۇپ ، ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسىدا ساقلاڭ.
2. ئەگەر تۆۋەن تېمپېراتۇرا ساقلاش جەريانىدا بۇففېر GDP سى چۆكۈش ئاسان بولسا ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۇنى ئۆي تېمپېراتۇرىسىغا بىر مەزگىل قويغىلى بولىدۇ.زۆرۈر تېپىلغاندا ، 37 ℃ سۇ مۇنچىسىدا چۆكمە پۈتۈنلەي ئېرىپ بولغۇچە قىزىتقىلى بولىدۇ ، ئاندىن ئارىلاشتۇرغاندىن كېيىن ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
3. سۇ مۇنچا تېمپېراتۇرىسىنى ئالدىن 50 ~ 55 to قىلىپ تەڭشەڭ.
4. 08-1 / گېنى ئېلىش پروگراممىسىنىڭ 1-قەدەمدە ، گېلى پارچىلىرىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكىنى كىچىكلىتىش ئېرىتىش ۋاقتىنى كۆرۈنەرلىك تۆۋەنلىتىدۇ ۋە ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمىنى ئۆستۈرىدۇ (يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ئۇدا ئاشكارلانغاندا سىزىقلىق DNA ئاسانلا گىدرولىزلىنىدۇ).ئۇلترا بىنەپشە نۇرنىڭ DNA بۇزۇلۇشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان بولغاچقا ، DNA گېلىنى ئۇزۇن ۋاقىت ئۇلترا بىنەپشە نۇرغا ئاشكارلىماڭ.
5. گېلىنى 08- 1 / گېلى ئېلىش پروگراممىسى 2-قەدەمدە تولۇق ئېرىتىڭ ، بولمىسا DNA ئەسلىگە كەلتۈرۈش ئۈنۈمى ئېغىر تەسىرگە ئۇچرايدۇ.
6. Elution Buffer ياكى ddH2O دىن 55 نى قىزىتىڭ ، بۇ DNA يوقىتىش ئۈنۈمىنى ئاشۇرۇشقا پايدىلىق.DNA نى 2.5 mM Tris-HCl ، pH 7.0 - 8.5 لىك ساقلاشتا ساقلاش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
