تېمپېراتۇرا سەزگۈر UNG
تېمپېراتۇرا سەزگۈر UNG (TS-UNG) E. coli دىكى قايتا ھاسىل قىلىش ئارقىلىق ئېرىشىلگەن.بۇ ئېنزىم سۈيدۈك تەركىبىدىكى يەككە ۋە قوش يۆنىلىشلىك DNA دىن ھەقسىز سۈيدۈك ئاجرىتىپ چىقىرىشنى تېزلىتىدۇ ھەمدە RNA غا قارشى ھەرىكەتسىز.E. coli گېنىنىڭ ئادەتتىكى UNG ئېنزىمغا سېلىشتۇرغاندا ، TS-UNG ئېنزىمنىڭ تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا (20 ℃ ~ 37 ℃) يۇقىرى ھەرىكەتچانلىقى بار بولۇپ ، تېمپېراتۇرا سەزگۈر ۋە ئاسان قوزغىتىلمايدۇ (50 ℃) ، DUTP بولغان كۈچەيتكۈچنىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلىنىدۇ. ئادەتتىكى UNG فېرمېنتى ئاكتىپلانغاندىن كېيىن قېلىپ قالغان قالدۇق پائالىيەتلەر ئارقىلىق ئۆي تېمپېراتۇرىسىدىكى مەھسۇلاتلار.شۇڭلاشقا ، TS-UNG فېرمېنتى PCR بۇلغىنىشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئىنكاسىغا ماس كېلىپلا قالماي ، RT-PCR كېڭەيتىش پروگراممىسى بىلەنمۇ ماس كېلىدۇ ، RT-PCR بۇلغىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئىنكاسىدا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
تەۋسىيە قىلىنغان ئىلتىماس
بۇلغىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش كۈچەيتىلىدۇ
ساقلاش ھالىتى
ئۇزۇن مۇددەت ساقلاش ئۈچۈن -20 ° C ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ ، دائىم مۇزلاشتىن ساقلىنىش كېرەك.
ساقلىغۇچ
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 1 سائەت ئىچىدە DU ئاساسى بار يەككە تاياقچە DNA نىڭ 1µg دەرىجىسىنى تۆۋەنلىتىشكە ئېھتىياجلىق ئېنزىمنىڭ مىقدارى 1 بىرلىك (U).
سۈپەت كونترول
1.SDS-PAGE ئېلېكتروفورېتىك ساپلىقى% 98 تىن يۇقىرى
2.دەرىجىسىنى تۆۋەنلىتىش پائالىيىتى ، تۈركۈمگە بۆلۈپ كونترول قىلىش ، مۇقىملىق
3.تاشقى يادرو پائالىيىتى يوق ، تاشقى مەنبەلىك ئىچكى ئاجراتما ياكى بۇلغىنىش بولمايدۇ.
كۆرسەتمە
| زاپچاسلار | ھەجىمى (μL) | ئاخىرقى مەركەزلىشىش |
| 10 × PCR Buffer (dNTP ھەقسىز ، Mg²+free) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP نى ئالماشتۇرۇڭ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U / μL Taq | 0.25 | 1.25 U. |
| 1 U / μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| قېلىپ | - | ＜ 1μg / reaction |
| ddH₂O | To 50 | - |
ئەسكەرتىش: a: ئەگەر qPCR / qRT-PCR ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن بولسا ، رېئاكسىيە سىستېمىسىغا فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى قوشۇلۇشى كېرەك.ئادەتتە ، ئەڭ ئاخىرقى دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2 mMM ياخشى ئۈنۈم بېرىدۇ.رېئاكسىيە ئىقتىدارى ناچار بولغاندا ، دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2-1 μM ئارىلىقىدا تەڭشىلىدۇ.ئادەتتە ، تەكشۈرۈش ئەسۋابىنىڭ قويۇقلۇقى 0.1-0.3 mM دائىرىدە ئەلالاشتۇرۇلىدۇ.قويۇقلۇقى تەدرىجىي تەجرىبە ئېلىپ بېرىلىپ ، پىرىمېر بىلەن تەكشۈرۈشنىڭ ئەڭ ياخشى بىرىكمىسىنى تاپقىلى بولىدۇ.
ئىزاھات
1.TS-UNG ئېنزىمنىڭ ئەڭ ياخشى رېئاكسىيە تېمپېراتۇرىسى بىر قەدەر تۆۋەن بولۇپ ، ئۇنى 20 ℃ ~ 37 range دائىرىدە ئەلالاشتۇرغىلى بولىدۇ ، فېرمېنتنىڭ مىقدارى ۋە ئىنكاس ۋاقتىنى 0.1 ~ 0.5 U ، 5 ~ ئارىلىقىدا ئەلالاشتۇرغىلى بولىدۇ. 10 مىنۇت;ھەمدە فېرمېنتنى تەتۈر كۆچۈرۈش جەريانىدا ئاكتىپلىغىلى بولىدۇ.
2.ئۇ PCR ۋە RT-PCR نىڭ بۇلغىنىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.
3.دائىم مۇزلاشتىن ساقلىنىڭ ، چوڭ تېمپېراتۇرىنىڭ داۋالغۇشىغا ئۇچرىماڭ.
4.كۈچەيتىلىدىغان ئوخشىمىغان گېنلارنىڭ DUTP نىڭ ئىشلىتىش ئۈنۈمى ۋە UNG ئېنزىمغا بولغان سەزگۈرلۈكى ئوخشىمايدۇ ، شۇڭلاشقا ، ئەگەر UNG سىستېمىسىنى ئىشلىتىش بايقاش سەزگۈرلۈكىنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقارسا ، ئىنكاس سىستېمىسىنى تەڭشەش ۋە ئەلالاشتۇرۇش كېرەك ، ئەگەر تېخنىكىلىق قوللاشقا ئېھتىياجلىق بولسىڭىز ، ئالاقىلىشىڭ شىركىتىمىز.
