مائۇس گېن توپلاش زاپچىسى

مۈشۈك نومۇرى: HCR2021A

بۇ مەھسۇلات چاشقاننىڭ گېن تىپلىرىنى تېز پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن يۈرۈشلۈك زاپچاس بولۇپ ، DNA خام نېفىت ئېلىش ۋە PCR كۈچەيتىش سىستېمىسى قاتارلىقلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.بۇ مەھسۇلات Lysis Buffer ۋە Proteinase k نىڭ ئاددىي يېرىلغاندىن كېيىن بىۋاسىتە مائۇس قۇيرۇقى ، قۇلاق ، پۇت بارمىقى ۋە باشقا توقۇلمىلاردىن PCR كېڭەيتىشكە ئىشلىتىلىدۇ.بىر كېچىدىلا ھەزىم قىلىش ، فېنول-خىلوروفورم ئېلىش ياكى تۈۋرۈك تازىلاش بولمايدۇ ، بۇ ئاددىي ھەم تەجرىبە ۋاقتىنى قىسقارتىدۇ.بۇ مەھسۇلات 2kb غىچە بولغان نىشان پارچىلىرىنى كېڭەيتىشكە ۋە 3 جۈپ پىرىسلاش ئارقىلىق كۆپ ئىقتىدارلىق PCR ئىنكاسىغا ماس كېلىدۇ.2 × مائۇس توقۇلمىسى بىۋاسىتە PCR ئارىلاشمىسىدا گېن ئارقىلىق ياسالغان DNA پولىمېراسى بار ، Mg²⁺، dNTPs ۋە ئەلالاشتۇرۇلغان بۇففېر سىستېمىسى يۇقىرى كۈچەيتكۈچ ئۈنۈمى ۋە چەكلىمىگە بەرداشلىق بېرىش ئىقتىدارى بىلەن تەمىنلەيدۇ ، بۇنداق بولغاندا PCR ئىنكاسى قېلىپ ۋە پىرىسلاش ۋە مەھسۇلاتنى 1 × غا قايتا سۇ تولۇقلاش ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىدۇ.بۇ مەھسۇلات بىلەن كۈچەيتىلگەن PCR مەھسۇلاتىنىڭ 3 ′ ئۇچىدا كۆزگە كۆرۈنەرلىك «A» ئاساسى بار ، ساپلاشتۇرۇلغاندىن كېيىن بىۋاسىتە TA كلونلاشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

زاپچاسلار

ساقلاش شەرتلىرى

مەھسۇلاتلارنى -25 ~ -15 at دە 2 يىل ساقلاش كېرەك.ئېرىگەندىن كېيىن ، Lysis Buffer نى 2 ~ 8 at ئەتراپىدا ساقلىغىلى بولىدۇ ھەمدە قىسقا مۇددەت كۆپ ئىشلەتكىلى بولىدۇ ، ئىشلەتكەندە ياخشى ئارىلاشتۇرغىلى بولىدۇ.

ئىلتىماس

بۇ مەھسۇلات چاشقىنەكنى شاللاش ئانالىزى ، گېننى تەكشۈرۈش ، گېن توپلاش قاتارلىقلارغا ماس كېلىدۇ.

Features

1.ئاددىي مەشغۇلات: گېن گۇرۇپپىسىنى ئېلىشنىڭ ھاجىتى يوق.

2.كەڭ قوللىنىشچان پروگرامما: ھەر خىل چاشقان توقۇلمىلىرىنى بىۋاسىتە كۈچەيتىشكە ماس كېلىدۇ.

كۆرسەتمە

1.گېن گۇرۇپپىسىنىڭ تارقىتىلىشى

1) لىزات تەييارلاش

توقۇلما لىمات چىلىدىغان چاشقان ئەۋرىشكىسى سانىغا ئاساسەن تەييارلىنىدۇ (توقۇلما لىماتنى مىقدارىغا ئاساسەن نەق مەيداندا تەييارلاپ ، تولۇق ئارىلاشتۇرۇپ ئىشلىتىش كېرەك) ، يەككە ئەۋرىشكە ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان رېئاكتورنىڭ نىسبىتى تۆۋەندىكىچە:

2) ئەۋرىشكە تەييارلاش ۋە لىز

توقۇلمىلارنى ئىشلىتىشنى تەۋسىيە قىلىمىز

پاكىز مەركەزدىن ياسالغان نەيچىگە مۇۋاپىق مىقداردا چاشقان توقۇلمىلىرى ئەۋرىشكىسىنى ئېلىپ ، ھەر بىر مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىگە 200μL يېڭى توقۇلما لىمات قوشۇڭ ، قاينام ۋە سىلكىڭ ، ئاندىن 55 at 30 دە 30 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ ، ئاندىن 98 at 3 مىنۇتتا قىزىتىمىز.

3) Centrifugation

لىزاتنى ياخشى سىلكىڭ ۋە مەركەزدىن قاچۇرۇش ۋاقتى 12000 rpm دە 5 مىنۇت.خاسىيەتلىك ئادەمنى PCR كېڭەيتىشنىڭ قېلىپى قىلىپ ئىشلىتىشكە بولىدۇ.ئەگەر قېلىپنى ساقلاشقا ئېھتىياجلىق بولسا ، خاسىيەتلىك كېمەنى باشقا ستېرېفېرېنسىيە نەيچىسىگە يۆتكەپ ، -20 at دە 2 ھەپتە ساقلاڭ.

2.PCR Amplification

2 × مائۇس توقۇلمىسى بىۋاسىتە PCR ئارىلاشمىسىنى -20 from دىن چىقىرىپ مۇزدا ئېرىتىپ ، تەتۈر ئارىلاشتۇرۇپ ، تۆۋەندىكى جەدۋەل بويىچە PCR ئىنكاس سىستېمىسىنى تەييارلاڭ (مۇز ئۈستىدە مەشغۇلات قىلىڭ):

ئەسكەرتىش:

a) قوشۇلغان سومما سىستېمىنىڭ 1/10 دىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك ، ئەگەر بەك كۆپ قوشۇلسا ، PCR نىڭ كۈچەيتىلىشى چەكلىنىشى مۇمكىن.

تەۋسىيە قىلىنغان PCR شەرتلىرى

ئەسكەرتىش:

a) تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى: دەسلەپكى كۆرسەتكۈچنىڭ Tm قىممىتىگە ئاساسەن ، يانتۇ تېمپېراتۇرىنى دەسلەپكى كىچىكرەك Tm قىممىتىگە تەڭشەش تەۋسىيە قىلىنىدۇ + 3 ~ 5 ℃.

كۆپ ئۇچرايدىغان مەسىلىلەر ۋە ھەل قىلىش چارىلىرى

1.نىشانلىق بەلۋاغ يوق

1) ھەددىدىن زىيادە لىز مەھسۇلاتلىرى.ئەڭ مۇۋاپىق مىقداردىكى قېلىپنى تاللاڭ ، ئادەتتە سىستېمىنىڭ 1/10 دىن ئېشىپ كەتمەيدۇ.

2) ئەۋرىشكە چوڭلۇقى بەك چوڭ.لىماتنى 10 قېتىم سۇيۇلدۇرۇڭ ، ئاندىن كۆپەيتىڭ ياكى ئەۋرىشكە كۆلىمىنى كىچىكلىتىڭ ۋە قايتا لىزلاڭ.

3) توقۇلما ئەۋرىشكىسى يېڭى ئەمەس.يېڭى توقۇلما ئەۋرىشكىسىنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ

4) دەسلەپكى سۈپەت سۈپىتىنىڭ ناچار بولۇشى.دەسلەپكى گېننىڭ سۈپىتىنى دەلىللەش ۋە دەسلەپكى لايىھەنى ئەلالاشتۇرۇش ئۈچۈن گېن گۇرۇپپىسىنى كېڭەيتىش ئۈچۈن ئىشلىتىڭ.

2.كونكرېت بولمىغان كېڭەيتىش

1) تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى بەك تۆۋەن ، دەۋرىيلىك سانى بەك كۆپ.تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنى ئۆستۈرۈپ ، دەۋرىيلىك سانىنى ئازايتىڭ.

2) قېلىپنىڭ قويۇقلۇقى بەك يۇقىرى.قېلىپنىڭ مىقدارىنى ئازايتىڭ ياكى كۈچەيتىلگەندىن كېيىن قېلىپنى 10 قېتىم سۇيۇلدۇرۇڭ

3) دەسلەپكى دەسلەپكى ئېنىقلىق دەرىجىسى ناچار.دەسلەپكى لايىھەنى ئەلالاشتۇرۇڭ.

ئىزاھات

1.ئەۋرىشكە ئارىسىدىكى ئۆز-ئارا بۇلغىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن ، كۆپ قېتىم ئەۋرىشكە ئېلىش قوراللىرىنى تەييارلاش ھەمدە قايتا-قايتا ئىشلىتىشكە توغرا كەلسە ، ھەر قېتىم ئەۋرىشكە ئېلىنغاندىن كېيىن% 2 ناترىي گىئوخلورىت ئېرىتمىسى ياكى يادرو كىسلاتا تازىلاش ماشىنىسى بىلەن قوراللارنىڭ يۈزىنى تازىلىغىلى بولىدۇ.

2.يېڭى چاشقان توقۇلمىلىرىنى ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ ، ئەۋرىشكە ئېلىش مىقدارى بەك چوڭ بولۇپ كەتمەسلىكى ، كۈچەيتىش نەتىجىسىگە تەسىر يەتكۈزمەسلىكى كېرەك.

3.Lysis Buffer دائىم توڭلىتىشتىن ساقلىنىش كېرەك ، قىسقا ۋاقىت ئىچىدە كۆپ ئىشلىتىش ئۈچۈن 2 ~ 8 at ئەتراپىدا ساقلىغىلى بولىدۇ.ئەگەر تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا ساقلانسا ، يامغۇر يېغىشى مۇمكىن ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن چوقۇم تولۇق ئېرىپ كېتىشى كېرەك.

4.PCR Mix دائىم توڭلىتىشتىن ساقلىنىشى كېرەك ، 4 at دە ساقلىغىلى بولىدۇ ھەمدە قىسقا مۇددەت قايتا ئىشلەتكىلى بولىدۇ.

5.بۇ مەھسۇلات پەقەت ئىلمىي تەجرىبە تەتقىقاتى ئۈچۈن بولۇپ ، كلىنىكىلىق دىئاگنوز قويۇش ياكى داۋالاشتا ئىشلىتىشكە بولمايدۇ.