Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG ياكى UDG) مولېكۇلا ئېغىرلىقى 25 kDa بولغان E.coli نىڭ قايتا ھاسىل بولىدىغان كلونى.ئۇ سۈيدۈك ئاجرىتىش سىستېمىسى بار سۈيدۈك تەركىبىدىكى يەككە ۋە قوش يۆنىلىشلىك DNA دىن ھەقسىز سۈيدۈك ئاجرىتىپ چىقىرىشنى تېزلىتىدۇ ، ھەمدە RNA غا قارشى ھەرىكەتچان بولۇپ ، PCR كۈچەيتمە مەھسۇلاتلىرىنىڭ بۇلغىنىشىنىڭ ئالدىنى ئالىدۇ.ھەرىكەت پرىنسىپى شۇنى ئىسپاتلايدۇكى ، ئەگەر PCR ئىنكاسىدا dUTP نىڭ ئورنىنى ئالسا ھەمدە dU ئاساسى بار PCR كۈچەيتمە مەھسۇلات شەكىللەنسە ، بۇ ئېنزىم يەككە تاياقچە ۋە قوش يۆنىلىشلىك U بازىسىنىڭ گلىكوزىدلىق باغلىنىشىنى تاللايدۇ. DNA ۋە PCR كۈچەيتمە مەھسۇلاتنى تۆۋەنلىتىدۇ.
تەۋسىيە قىلىنغان ئىلتىماس
بۇلغىنىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش كۈچەيتىلىدۇ
ساقلاش ھالىتى
ئۇزۇن مۇددەت ساقلاش ئۈچۈن -20 ° C ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ ، دائىم مۇزلاشتىن ساقلىنىش كېرەك.
ساقلىغۇچ
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 1 سائەت ئىچىدە DU ئاساسى بار يەككە تاياقچە DNA نىڭ 1µg دەرىجىسىنى تۆۋەنلىتىشكە ئېھتىياجلىق ئېنزىمنىڭ مىقدارى 1 بىرلىك.
سۈپەت كونترول
1.SDS-PAGE ئېلېكتروفورېتىك ساپلىقى% 98 تىن يۇقىرى
2.كۈچەيتىش سەزگۈرلۈكى ، تۈركۈمگە بۆلۈپ كونترول قىلىش ، مۇقىملىق
3.UNG نىڭ 1U 50 at 2 مىنۇتتا بىر تەرەپ قىلىنغاندىن كېيىن ، 103 نۇسخا ئاستىدىكى U بولغان قېلىپ پۈتۈنلەي بۇزۇلۇشى ۋە كۈچەيتمە مەھسۇلات ئىشلەپچىقارغىلى بولمايدۇ.
4.تاشقى مەنبەلىك پائالىيەت يوق
كۆرسەتمە
| زاپچاسلار | ھەجىمى (μL) | ئاخىرقى مەركەزلىشىش |
| 10 × PCR Buffer (dNTP ھەقسىز ، Mg²+free) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (dTTP نى ئالماشتۇرۇڭ) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U / μL Taq | 0.25 | 1.25 U. |
| 5 U / μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1 × |
| قېلىپ | - | ＜ 1μg / reaction |
| ddH₂O | To 50 | - |
ئەسكەرتىش: جاۋاب: ئەگەر qPCR / qRT-PCR ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن بولسا ، رېئاكسىيە سىستېمىسىغا فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى قوشۇشى كېرەك.ئادەتتە ، ئەڭ ئاخىرقى دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2 mMM ياخشى ئۈنۈم بېرىدۇ.رېئاكسىيە ئىقتىدارى ناچار بولغاندا ، دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2-1 μM ئارىلىقىدا تەڭشىلىدۇ.ئادەتتە ، تەكشۈرۈش ئەسۋابىنىڭ قويۇقلۇقى 0.1-0.3 mM دائىرىدە ئەلالاشتۇرۇلىدۇ.قويۇقلۇقى تەدرىجىي تەجرىبە ئېلىپ بېرىلىپ ، پىرىمېر بىلەن تەكشۈرۈشنىڭ ئەڭ ياخشى بىرىكمىسىنى تاپقىلى بولىدۇ.
ئىزاھات
1.UNG فېرمېنتى PCR كېڭەيتىش رېئاكسىيەسىدىن ئىلگىرى بۇلغانغان DUTP كۈچەيتمە مەھسۇلاتلىرىنى ئىنكاس سىستېمىسىدىن چىقىرىۋېتىشكە ، ئاندىن مەھسۇلاتنىڭ بۇلغىنىشى سەۋەبىدىن يالغان مۇسبەت نەتىجىدىن ساقلىنىشقا بولىدۇ.
2.UNG ئېنزىمنىڭ بۇلغىنىشقا قارشى تۇرۇش ئىنكاسىدا ئىشلىتىلىدىغان ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا ئادەتتە 2 مىنۇتتا 50 is بولىدۇ.ھەرىكەتسىزلىنىش ھالىتى 95 5 5 مىنۇت.
3.دائىم مۇزلاشتىن ساقلىنىڭ ، چوڭ تېمپېراتۇرىنىڭ داۋالغۇشىغا ئۇچرىماڭ.
4.كۈچەيتىلىدىغان ئوخشىمىغان گېنلارنىڭ DUTP نىڭ ئىشلىتىش ئۈنۈمى ۋە UNG ئېنزىمغا بولغان سەزگۈرلۈكى ئوخشىمايدۇ ، شۇڭلاشقا ، ئەگەر UNG سىستېمىسىنى ئىشلىتىش بايقاش سەزگۈرلۈكىنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقارسا ، ئىنكاس سىستېمىسىنى تەڭشەش ۋە ئەلالاشتۇرۇش كېرەك ، ئەگەر تېخنىكىلىق قوللاشقا ئېھتىياجلىق بولسىڭىز ، ئالاقىلىشىڭ شىركىتىمىز.
