Superstart qPCR Premix plus-UNG
مۈشۈك نومۇرى: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG بولسا مەخسۇس ۋاقىت رېئاكسىيەسى بولۇپ ، تەكشۈرۈش ۋاقتى ئارقىلىق PCR نىڭ سۈپەت ۋە مىقدار ئىنكاسى ئۈچۈن لايىھىلەنگەن بولۇپ ، مەخسۇس لىمفىللاشتۇرۇش جەريانى ئۈچۈن ياسالغان.ئۇنىڭدا Hotstart Taq plus (DG) ناملىق رومان قىزىق باشلىنىش فېرمېنتى بار بولۇپ ، ئۇنىڭ Taq فېرمېنتى پائالىيىتى ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا پېچەتلەنگەن بولۇپ ، تۆۋەن تېمپېراتۇرا شارائىتىدا ئىپتىدائىي ئالاھىدە باغلىنىش ياكى ئىپتىدائىي دىمېر شەكىللىنىشتىن كېلىپ چىققان ئالاھىدە كۈچەيتمەسلىكنى ئۈنۈملۈك چەكلەيدۇ. كۈچەيتىش ئىنكاسىنىڭ كونكرېتلىقى.بۇ رېئاكتور ئەلالاشتۇرۇلغان qPCR ئالاھىدە بۇففېر ۋە UNG / dUTP بۇلغىنىشقا قارشى تۇرۇش سىستېمىسى ئىشلىتىپ ، تېز قوزغىتىشنى ئىشقا ئاشۇرۇپ ، qPCR ئىنكاسىنىڭ ئۈنۈمى ۋە سەزگۈرلۈكىنى زور دەرىجىدە ئۆستۈرىدۇ.ئۇ كەڭ دائىرىدە ياخشى ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىققا ئېرىشەلەيدۇ ھەمدە مىقدارنى توغرا ئىجرا قىلالايدۇ ، قالدۇق PCR مەھسۇلاتلىرى ياكى ئايروسولنىڭ بۇلغىنىشىدىن كېلىپ چىققان يالغان ئاكتىپ كۈچەيتىشنىڭ ئۈنۈملۈك ئالدىنى ئالىدۇ.بۇ رېئاكتور قوللىنىشچان بىئولوگىيىلىك سىستېما ، Eppendorf ، Bio- Rad ۋە Roche قاتارلىق ئىشلەپچىقارغۇچىلارنىڭ كۆپىنچە فتور فېرمېنتلىق PCR ئەسۋابلىرىغا ماسلىشالايدۇ ھەمدە لىمفىللانغان شەكىلدە ياخشى مۇقىملىقنى نامايان قىلىدۇ.
رېئاكسىيە تەركىبى
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+free) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × لىيوپروتىك (ئىختىيارىي)
ساقلاش شەرتلىرى
ئۇزۇن مۇددەتلىك ساقلاش -20 at;4 at دا 3 ئاي ساقلىغىلى بولىدۇ.ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭقايتا-قايتا مۇزلاش ۋە ئېرىتىشتىن ساقلىنىڭ.
ۋېلىسىپىت مىنىش كېلىشىمنامىسى
| تەرتىپ | Temp. | ۋاقىت | دەۋرىيلىك |
| ھەزىم قىلىش | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| پولىمېرازا ئاكتىپلاش | 95 ℃ | 1 ~ 5 مىنۇت | 1 |
| رەت قىلىش | 95 ℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Annealing and Extension | 56 ~ 64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR سۇيۇقلۇق رېئاكسىيەسى Syغول تەييارلىق
|
تەركىبى |
25µL Volume |
50µL Volume |
Final Concentration |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG(Mg2+free) (DG) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4 × lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1 × |
| 25 × Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| قېلىپ DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | To 25µL | To 50µL | —— |
1. پىرىمېرلارنىڭ ئاخىرقى قويۇقلۇقى 0.2μM ئادەتتە ياخشى ئۈنۈم بېرىدۇ.ئىنكاس قايتۇرۇش ئىقتىدارى ناچار بولغاندا ، ئېھتىياجغا ئاساسەن دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2-1μM ئارىلىقىدا تەڭشەڭ.تەكشۈرۈشنىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە تەدرىجىي تەجرىبە ئارقىلىق 0.1-0.3μM ئارىلىقىدا ئەلالاشتۇرۇلۇپ ، ئەڭ ياخشى بىرىكمىلەرنى تاپقىلى بولىدۇ.
2. ئوخشىمىغان تىپتىكى قېلىپلاردىكى نىشان گېننىڭ كۆپەيتىلگەن سانى ئوخشىمايدۇ.ئەگەر زۆرۈر بولسا ، تەدرىجىي سۇيۇلدۇرۇپ ، ئەڭ ياخشى قېلىپ قوشۇش مىقدارىنى بەلگىلىگىلى بولىدۇ.
3. بۇ سىستېمىنى لىمفىللاشتۇرغىلى بولىدۇ.خېرىدارلار بۇ سىستېمىنى توڭلىتىش-قۇرۇتۇش تەلىپىسىز ئىشلەتكەندە ، 4 × لىكوپروتېكتورنى تاللىغىلى بولىدۇ ؛ ئەگەر توڭلىتىلغان قۇرۇتۇلغان مەھسۇلاتلار تەلەپ قىلىنسا ، سۇيۇقلۇق رېئاكتور باسقۇچلۇق مەھسۇلاتنىڭ ئۈنۈمىنى دەلىللەش جەريانىدا ، چوقۇم 4 × لىكوپروتېكتور قوشۇپ ، لىمفىللانغان سىستېما زاپچاسلىرىنىڭ بىردەكلىكىگە كاپالەتلىك قىلىشى كېرەك. and effects.
سىستېما ئىشلىتىلگەندەd توڭلىتىش-قۇرۇتۇش ئۈچۈن ، تەييارلاڭ سىستېما as تۆۋەندىكى:
| تەركىبى | 25µL ئىنكاس سىستېمىسى |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+free) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4 op lyoprotectant | 6.25µL |
| 25 × Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | 18 ~ 20µL غىچە |
* توڭلىتىش-قۇرۇتۇشنىڭ باشقا سىستېمىلىرى لازىم بولسا ، ئايرىم مەسلىھەت سوراڭ.
Lyophilization Process
| تەرتىپ | Temp. | ۋاقىت | شەرت | بېسىم |
| ئالدىن توڭلىتىش | 4 ℃ | 30 مىنۇت | تۇتۇڭ |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 مىنۇت | Cooling | ||
| -50 ℃ | 180 مىنۇت | تۇتۇڭ | ||
| دەسلەپكى قۇرۇتۇش | -30 ℃ | 60 مىنۇت | ئىسسىقلىق |
Ultimate Vacuum |
| -30 ℃ | 70 مىنۇت | تۇتۇڭ | ||
| ئىككىلەمچى قۇرۇتۇش | 25 ℃ | 60 مىنۇت | ئىسسىقلىق |
Ultimate Vacuum |
| 25 ℃ | 300 مىنۇت | تۇتۇڭ |
2. يۇقارقى لىيوفىللاشتۇرۇش جەريانى پەقەت پايدىلىنىش ئۈچۈندۇر.ئوخشىمىغان مەھسۇلات تۈرلىرى ۋە ئوخشىمىغان توڭلاتقۇنىڭ پارامېتىرلىرى ئوخشىمايدۇ ، شۇڭا ئەمەلىي ئەھۋالغا ئاساسەن تەڭشەش ئېلىپ بارغىلى بولىدۇئىشلىتىش جەريانىدا شارائىت.
3. ئوخشىمىغان لىمفا ھۈجەيرىسىنىڭ جەريانلىرى ئوخشىمىغان تۈركۈمدىكى لىمفىللاشتۇرۇلغان چوڭلۇققا ماس كېلىشى مۇمكىنمەھسۇلاتلار ، شۇڭا كەڭ كۆلەمدە ئىشلەپچىقىرىشقا ئىشلەتكەندە چوقۇم يېتەرلىك سىناق دەلىللەش ئېلىپ بېرىلىشى كېرەك.
لىيوفىلىز ئىشلىتىش ھەققىدىكى كۆرسەتمەd پاراشوك
1. لىيوفىللانغان پاراشوكنى قىسقىچە مەركەزلەشتۈرۈش
2. لىمفىللانغان پاراشوكقا يادرو كىسلاتا قېلىپىنى قوشۇپ ، 25µL غىچە سۇ قوشۇڭ.
3. مەركەزدىن قاچۇرۇش ئارقىلىق ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە ماشىنىدا ئىجرا قىلىڭ.
سۈپەت كونترول:
1. ئىقتىدار سىنىقى: سەزگۈرلۈك ، خاسلىق ، qPCR نىڭ كۆپىيىشچانلىقى.
2. تاشقى ھۈجەيرە پائالىيىتى بولمايدۇ ، تاشقى مەنبەلىك ئىچكى ئاجرالمىلار ۋە بۇلغىنىش بولمايدۇ.
تېخنىكىلىق ئۇچۇرلار:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG رومان ~ قىزىق ئېنزىمنى ئىشلىتىپ ، 1 ~ 5 مىنۇت ئىچىدە تېز قىزىتىشنى قوزغىتىدۇ.ئالاھىدە بۇففېر فورمۇلا ئارقىلىق كۆپ ئىقتىدارلىق فلۇئورېسسېنسىيەلىك PCR ئىنكاسىغا ماس كېلىدۇ.
2. ئۇ تېخىمۇ يۇقىرى ئالاھىدىلىككە ئىگە بولۇپ ، فتور فېرمېنسىيىلىك مىقدار PCR چەكلىمىسىنى بايقاشنىڭ سەزگۈرلۈكىنى كۆرۈنەرلىك ياخشىلايدۇ ، كۈچەيتمە ئەگرى سىزىقنى نورماللاشتۇرىدۇ ، فلۇئورېسسېنسىيە قىممىتى تۆۋەن قويۇقلۇق ئەندىزىسىدە كۆرۈنەرلىك ياخشىلىنىشقا ئېرىشىدۇ ، يۇقىرى سەزگۈرلۈك فلۇئورېسسېنسىيە مىقدار PCR بايقاش رېئاكتورىغا ماس كېلىدۇ.
3. تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى تۆۋەن ياكى 200bp پارچىدىن ئۇزۇن بولغان پىرىمېرلارغا 3 باسقۇچلۇق ئۇسۇل تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
4. DUTP نىڭ ئىشلىتىش ئۈنۈمى ۋە UNG ئېنزىمغا بولغان سەزگۈرلۈكى ئوخشىمىغان نىشان گېنلىرىغا ئوخشىمايدۇ ، شۇڭا ئەگەر UNG سىستېمىسىنى ئىشلىتىش بايقاش سەزگۈرلۈكىنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقارسا ، ئىنكاس سىستېمىسىنى تەڭشەش ۋە ئەلالاشتۇرۇش كېرەك.ئەگەر تېخنىكىلىق ياردەم تەلەپ قىلىنسا شىركىتىمىز بىلەن ئالاقىلىشىڭ.
5. كېڭەيتىشنىڭ ئالدى-كەينىدە مەخسۇس رايون ۋە تۇرۇبا ئىشلىتىڭ ، مەشغۇلات جەريانىدا پەلەي كىيىڭ ھەمدە دائىم ئالماشتۇرۇڭ.PCR تاماملانغاندىن كېيىن ئىنكاس نەيچىسىنى ئاچماڭ ، PCR مەھسۇلاتلىرىنىڭ ئەۋرىشكىنىڭ بۇلغىنىشىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈڭ.
