ئاقسىل K mNGS (سۇيۇقلۇق)
ئاقسىل K بولسا تۇراقلىق ئاقسىل بولۇپ ، كەڭ بەلۋاغنىڭ ئالاھىدىلىكى بار.يۇيۇش سۇيۇقلۇقى بولغان تەقدىردىمۇ ، ئانا تۇپراقتىكى نۇرغۇن ئاقسىلنى تۆۋەنلىتىدۇ.خرۇستال ۋە مولېكۇلا قۇرۇلما تەتقىقاتىدىكى پاكىتلار فېرمېنتنىڭ ئاكتىپ تور كاتالىزاتورلۇق ئۈچ تەرەپ (Subp) ئائىلىسىگە تەۋە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.39-His69-سېر224).يېرىلىشنىڭ ئاساسلىق ئورنى ئالفا ئامىنو گۇرۇپپىسى توسۇلۇپ قالغان ئالفاتىك ۋە خۇشپۇراق ئامىنو كىسلاتانىڭ كاربون توپىغا قوشنا پېپتىد باغلىنىشى.ئۇ ئادەتتە كەڭلىكى ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.بۇ ئاقسىل K ئالاھىدە mNGS ئۈچۈن لايىھەلەنگەن.باشقا ئاقسىل K غا سېلىشتۇرغاندا ، ئۇنىڭدا ئوخشاش ئېنزىم ئىقتىدارى بىلەن يادرو كىسلاتاسىنىڭ بۇلغىنىشى تېخىمۇ ئاز بولۇپ ، تۆۋەن ئېقىندىكى mNGS قوللىنىشچانلىقىغا تېخىمۇ ياخشى كاپالەتلىك قىلالايدۇ.
ساقلاش شەرتلىرى
2-8 2 2 يىل
Specification
| كۆرۈنۈش | سۇس قوڭۇر رەڭلىك سۇيۇقلۇق |
| پائالىيەت | 00800 U / ml |
| ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى | ≥20 mg / ml |
| Nickase | ھېچكىم بايقالمىدى |
| DNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
| RNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
خاسلىقى
| EC نومۇرى | 3.4.21.64(Tritirachium پىلاستىنكىسىدىن قايتا پايدىلىنىش) |
| Isoelectric point | 7.81 |
| ئەڭ ياخشى pH | 7.0- 12.0 رەسىم 1 |
| ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا | 65 ℃ 2 |
| pH مۇقىملىقى | pH 4.5- 12.5 (25 ℃, 16 h) 3-رەسىم |
| ئىسسىقلىق مۇقىملىقى | 50 دىن تۆۋەن (pH 8.0 ، 30 مىنۇت) 4-رەسىم |
| ساقلاش مۇقىملىقى | % 90 تىن ئارتۇق پائالىيەت 12 ئاي ئىچىدە 25 at |
| ئاكتىپلىغۇچىلار | SDS ، ئۇرېيە |
| Inhibitor | دىئىزوپروپىل فتوروفوسفاتفېنىلمېتىل سۇلفونىل فتور |
قوللىنىشچان پروگراممىلار
1. ئىرسىيەت دىئاگنوز قويۇش زاپچىسى
2. RNA ۋە DNA ئېلىش زاپچاسلىرى
3. توقۇلمىلاردىن ئاقسىل بولمىغان تەركىبلەرنى ئېلىش ، DNA قاتارلىق ئاقسىل ماددىلىرىنىڭ ناچارلىشىشىۋاكسىنى ۋە گېپارىن تەييارلاش
4. تومۇر سوقۇلغان ئېلېكتروفورېز ئارقىلىق خروموسوم DNA نى تەييارلاش
5. غەرب توپى
6. ۋىرۇسقا دىئاگنوز قويۇشتىكى ئېنزىملىق گلىكوزىللانغان پىلاستىنكا رېئاكتورى
ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى
ئىشلەتكەندە ياكى ئۆلچەشتە قوغداش پەلەي ۋە كۆزەينەك تاقاش ، ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن ياخشى شامالدىتىش كېرەك.بۇ مەھسۇلات تېرە سەزگۈرلۈك ئىنكاسى ۋە كۆزنىڭ ئېغىر دەرىجىدە غىدىقلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.ئەگەر سۈمۈرۈلسە ، سەزگۈرلۈك ياكى زىققا ئالامەتلىرى ياكى ھەزىم قىلىش ياخشى بولماسلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.نەپەسلىنىشنى غىدىقلاشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك (U) گىدرولىز كاسىنغا 1 مىللىمېتىر ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن كېرەكلىك ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەنتۆۋەندىكى شارائىتتا مىنۇتىغا تىروسىن.
Reagents preparation
رېئاكتىپ I: 1g سۈت قېپى 50 مىللىمېتىر 0.1M ناترىي فوسفات ئېرىتمىسى (pH 8.0) ئېرىتىلگەن ، 65-70 ℃ سۇغا 15 مىنۇت سىڭدۈرۈلگەن ، ئارىلاشتۇرۇلغان ۋە ئېرىتىلگەن ، سۇ بىلەن سوۋۇتۇلغان ، ناترىي گىدروكسىد بىلەن pH 8.0 گە تەڭشەلگەن ۋە مىقدارى مۇقىم. 100ml.
رېئاكتور II: 0.1M ترىخلوروئاسسىك كىسلاتا ، 0.2M ناترىي كىسلاتا ، 0.3M كىسلاتا كىسلاتاسى.
Reagent III: 0.4M Na2CO3ھەل قىلىش چارىسى.
تۆتىنچى رېئاكتور: فىنتىن رېئاكتورى ساپ سۇ بىلەن 5 قېتىم سۇيۇلدى.
رېئاكتور V: ئېنزىم سۇيۇقلۇقى: 0.1M ناترىي فوسفات ئېرىتمىسى (pH 8.0).
رېئاكتىپ VI: تىروسىن ئېرىتمىسى: 0 ، 0.005 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.075 ، 0.1 ، 0.25 umol / ml تىروسىن 0.2 بىلەن ئېرىپ كەتتى.M HCl.
تەرتىپ
1. 0.5ml رېئاكتور I 37 to ئالدىن قىزىتىلىدۇ ، 0.5ml فېرمېنت ئېرىتمىسى قوشۇپ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ ،37 ℃ 10mins.
2. رېئاكسىيە II دىن 1ml نى قوشۇپ ئىنكاسنى توختىتىڭ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە 30 مىنۇت داۋاملاشتۇرۇڭ.
3. مەركەزدىن ئىنكاس قايتۇرۇش ھەل قىلىش چارىسى.
4. 0.5ml خاسىيەتلىك ماددا ئېلىپ ، 2.5ml رېئاكتور III ، 0.5ml رېئاكتور IV نى قوشۇڭ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە 37 atfor 30mins.
5. OD660OD قىلىپ بېكىتىلدى1;قۇرۇق كونترول گۇرۇپپىسى: فېرمېنتنىڭ ئورنىنى ئېلىش ئۈچۈن 0.5ml رېئاكتور V ئىشلىتىلىدۇOD نى ئېنىقلاشنىڭ چارىسى660as OD2, ΔOD = OD1-OD2.
6. L- تىروزىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق: 0.5mL ئوخشىمىغان قويۇقلۇق دەرىجىسى L- تىروزىن ئېرىتمىسى ، 2.5mL رېئاكتور III ، 0.5mL رېئاكتور IV660L-tyrosine نىڭ ئوخشىمىغان قويۇقلۇقى ئۈچۈن ، ئاندىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق Y = kX + b غا ئېرىشتى ، بۇ يەردىكى Y بولسا L- تىروسىن قويۇقلۇقى ، X بولسا OD600.
ھېسابلاش
2: رېئاكسىيە ھەل قىلىش ئومۇمىي مىقدارى (mL)
0.5: فېرمېنت ئېرىتمىسىنىڭ مىقدارى (mL)
0.5: خروموگېن بەلگىلەشتە ئىشلىتىلىدىغان رېئاكسىيە سۇيۇقلۇقى (mL)
10: ئىنكاس ۋاقتى (مىنۇت)
Df: كۆپ خىللاشتۇرۇش
C: ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى (mg / mL)
پايدىلانما
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Commun.(1971);44: 513.
3. Hilz, H.et al.,Eur.J. Biochem.(1975);56: 103-108.
4. Sambrook J.et al., مولېكۇلا كلونلاش: تەجرىبىخانا قوللانمىسى ، 2-نەشرى ، سوغۇق بۇلاق پورتىتەجرىبىخانا نەشرىياتى ، سوغۇق بۇلاق پورتى (1989).
سان
رەسىم.1 ئەڭ ياخشى pH
100mM بۇففېر ئېرىتمىسى: pH6.0-8.0 ، Na- فوسفاتpH8.0-9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5 ، Glycine-NaOH. ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1mg / mL
2-رەسىم
20 mM K- فوسفاتلىق بۇففېر pH 8.0 دىكى ئىنكاس.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1 mg / mL
رەسىم 3 pH مۇقىملىق
25 ℃ ، 50 hM لىق بۇففېر ئېرىتمىسى بىلەن 16 h داۋالاش: pH 4.5- 5.5 ، Acetate;pH 6.0-8.0, Na-phosphate;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0- 12.5, Glycine-NaOH.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1 mg / mL
4-رەسىم مۇقىملىق
30 مىنۇتلۇق داۋالاش 50MM Tris-HCl بۇففېر ، pH 8.0.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1 mg / mL
5-رەسىم stability at 25 ℃
