Rnase Inhibitor
Murine RNase ئىنگىبىتور E.coli دىن ئىپادىلەنگەن ۋە ساپلاشتۇرۇلغان قايتا ھاسىل بولىدىغان قاتىل RNase ئىنگىبىتور.ئۇ كوئېنسىز باغلىنىش ئارقىلىق 1: 1 نىسبەتتە RNase A, B ياكى C بىلەن تۇتىشىدۇ ، بۇ ئارقىلىق ئۈچ خىل ئېنزىمنىڭ پائالىيىتىنى چەكلەيدۇ ۋە RNA نىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلايدۇ.قانداقلا بولمىسۇن ، ئاسپېرگىلۇستىن كەلگەن RNase 1 ، RNase T1 ، S1 يادروسى ، RNase H ياكى RNase غا قارشى ئۈنۈملۈك ئەمەس.Murine RNase ئىنگىبىتور RT-PCR ، RT-qPCR ۋە IVT mRNA تەرىپىدىن سىناق قىلىنغان بولۇپ ، ھەرخىل سودا تەتۈر كۆچۈرۈلگەن خاتىرىلەر ، DNA پولىمېراسى ۋە RNA پولىمېراسى بىلەن ماسلاشقان.
ئىنسانلارنىڭ RNase ئىنگىبىتورلىرىغا سېلىشتۇرغاندا ، مۇسكۇل RNase چەكلىگۈچ ئوكسىدلىنىشقا ئىنتايىن سەزگۈر بولغان ئىككى خىل سىستېننى ئۆز ئىچىگە ئالمايدۇ.ئۇنى DTT نىڭ تۆۋەن قويۇقلۇقىدا مۇقىملاشتۇرىدۇ (1 mM دىن تۆۋەن).بۇ ئىقتىدار يۇقىرى قويۇقلۇقتىكى DTT رېئاكسىيەگە پايدىسىز بولغان ئىنكاسلاردا ئىشلىتىشكە ماس كېلىدۇ (مەسىلەن Real-time RT-PCR).
Aئىلتىماس
بۇ مەھسۇلاتنى RNase نىڭ ئارىلىشىشى مۇمكىن بولغان ھەر قانداق تەجرىبىدە كەڭ كۆلەمدە ئىشلىتىشكە بولىدۇ ، مەسىلەن:
1.CDNA ، RT-PCR ، RT-qPCR قاتارلىق بىرىنچى قاتارنىڭ بىرىكىشى
2.ۋىرۇس كۆچۈرۈش / تەرجىمە جەريانىدا (مەسىلەن ، ۋىرۇسنى كۆپەيتىش سىستېمىسىدا) RNA نىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلايدۇ.
3.RNA ئايرىش ۋە تازىلاش جەريانىدا RNase پائالىيىتىنى چەكلەش.
ساقلاش شەرتلىرى
بۇ مەھسۇلاتنى -25 ～ - 15 at دە ساقلىغىلى بولىدۇ ، كۈچكە ئىگە 2 يىل.
ساقلىغۇچ
50 mM KCl ، 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6 ، 25 ℃) ، 8 mM DTT ۋە% 50 گلىتسېرىن.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
5ng لىك رىبونۇكلېئۇس A نىڭ پائالىيىتىنى% 50 چەكلەش ئۈچۈن تەلەپ قىلىنغان قاتىل RNase چەكلىگۈچنىڭ مىقدارى بىر بىرلىك (U) قىلىپ بېكىتىلدى.
ئاقسىلنىڭ مولېكۇلا ئېغىرلىقى
مۇرىن RNase چەكلىگۈچىنىڭ مولېكۇلا ئېغىرلىقى 50 kDa.
سۈپەت كونترول قىلىش
Exonuclease پائالىيەت:
40 U مۇرىن RNase ئىنگىبىتور بىلەن 1 μg λ -Hind III ھەزىم قىلىش DNA 37 37 at 16 سائەت 16 سائەت ئىچىدە ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى تەرىپىدىن بېكىتىلگەن بۇزۇلمايدۇ.
Endonuclease پائالىيىتى:
40 U مۇرىن RNase ئىنگىبىتور 1μ g λ DNA بىلەن 37 at 16 سائەت 16 سائەت ئىچىدە ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى تەرىپىدىن بېكىتىلگەن بۇزۇلمايدۇ.
Nicking پائالىيەت:
40U مۇرىن RNase ئىنگىبىتور بىلەن 1μ g pBR322 37 37 at 16 سائەت 16 سائەت ئىچىدە ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى تەرىپىدىن بېكىتىلگەن بۇزۇلۇش پەيدا قىلمايدۇ.
RNase پائالىيەت:
40U مۇرىن RNase ئىنگىبىتور 1.6μ g MS2 RNA بىلەن 4h 37 at 37 at بولغاندا ، ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى تەرىپىدىن بېكىتىلگەن بۇزۇلۇش پەيدا قىلمايدۇ.
E.coli DNA:
40 U مۇرىن RNase ئىنگىبىتور E. coli 16S rRNA چېكەتكىسىگە خاس بولغان دەسلەپكى كۆرسەتكۈچلەر بىلەن TaqMan qPCR ئارقىلىق E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ بار-يوقلۇقى تەكشۈرۈلىدۇ.E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ DNA بۇلغىنىشى ≤ 0.1 pg / 40 U.
Notes
1. زوراۋان تەۋرىنىش ياكى قوزغىتىش ئېنزىمنىڭ ئاكتىپسىزلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ.
2. بۇ چەكلىگۈچنىڭ ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا دائىرىسى 25-55 was بولۇپ ، 65 at ۋە ئۇنىڭدىن يۇقىرى ھالەتتە ئاكتىپسىزلانغان.
3. RNase H ، RNase 1 ۋە RNase T1 نىڭ پائالىيەتلىرى قاتىل RNase ئىنگىبىتور تەرىپىدىن توسقۇنلۇققا ئۇچرىمىدى.
4. RNase پائالىيىتىنىڭ چەكلىنىشى كەڭ دائىرىدە pH (pH 5-9 ھەممىسى ئاكتىپ) بايقالدى ، ئەڭ يۇقىرى پائالىيەت pH 7-8 دە كۆرۈلدى.
5. رىبونۇكلېئاس ئادەتتە دانىخورەك شارائىتىدا پائالىيەتنى ساقلاپ قالىدىغان بولغاچقا ، چوقۇم لېنتا بىلەن مۇرەككەپ بولغان RNase Inhibitor مولېكۇلاسىنىڭ بۇزۇلۇشىدىن ساقلىنىش كېرەك.ئاكتىپ لېنتا قويۇپ بېرىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن ، تېمپېراتۇرا ° C50 تىن يۇقىرى ، ئۇرېيە ياكى باشقا قويۇقلاندۇرۇش دورىسى قويۇقلۇقىدىن ساقلىنىش كېرەك.
