ئاقسىل K (سۇيۇقلۇق)
مۈشۈك نومۇرى: HC4502A
ئاقسىل K بولسا تۇراقلىق ئاقسىل بولۇپ ، كەڭ بەلۋاغنىڭ ئالاھىدىلىكى بار.يۇيۇش سۇيۇقلۇقى بولغان تەقدىردىمۇ ، ئانا تۇپراقتىكى نۇرغۇن ئاقسىلنى تۆۋەنلىتىدۇ.خرۇستال ۋە مولېكۇلا قۇرۇلما تەتقىقاتىدىكى پاكىتلار فېرمېنتنىڭ ئاكتىپ تور كاتالىزاتورلۇق ئۈچ تەرەپ (Subp) ئائىلىسىگە تەۋە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.39-His69- Ser224).يېرىلىشنىڭ ئاساسلىق ئورنى ئالفا ئامىنو گۇرۇپپىسى توسۇلۇپ قالغان ئالفاتىك ۋە خۇشپۇراق ئامىنو كىسلاتانىڭ كاربون توپىغا قوشنا پېپتىد باغلىنىشى.ئۇ ئادەتتە كەڭلىكى ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇكونكرېت.
Specification
| كۆرۈنۈش | سۇس قوڭۇر رەڭلىك سۇيۇقلۇق |
| پائالىيەت | 00800 U / ml |
| ئاقسىلنىڭ قويۇقلۇقى | ≥20 mg / ml |
| DNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
| RNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
ساقلاش شەرتلىرى
2-8 temperature تېمپېراتۇرىدا ساقلاڭ.
خاسلىقى
| EC نومۇرى | 3.4.21.64 (R.Tritirachium پىلاستىنكىسىدىكى ecombinant) |
| مولېكۇلا ئېغىرلىقى | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric point | 7.81 |
| ئەڭ ياخشى pH | 7.0-12.0 رەسىم .1 |
| ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا | 65 ℃ Fig |
| pH مۇقىملىقى | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16 h) رەسىم .3 |
| ئىسسىقلىق مۇقىملىقى | 50 دىن تۆۋەن (pH 8.0 ، 30 مىنۇت) رەسىم 4 |
| ئاكتىپلىغۇچىلار | SDS ، ئۇرېيە |
| Inhibitor | دىئىزوپروپىل فتوروفوسفاتفېنىلمېتىل سۇلفونىل فتور |
قوللىنىشچان پروگراممىلار
1. ئىرسىيەت دىئاگنوز قويۇش زاپچىسى
2. RNA ۋە DNA ئېلىش زاپچاسلىرى
3. توقۇلمىلاردىن ئاقسىل بولمىغان تەركىبلەرنى ئېلىش ، DNA ۋاكسىنىسى ۋە گېپارىن تەييارلاش قاتارلىق ئاقسىلنىڭ بۇلغىنىشى.
4. تومۇر سوقۇلغان ئېلېكتروفورېز ئارقىلىق خروموسوم DNA نى تەييارلاش
5. غەرب توپى
6. ۋىرۇسقا دىئاگنوز قويۇشتىكى ئېنزىملىق گلىكوزىللانغان پىلاستىنكا رېئاكتورى
ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى
ئىشلەتكەندە ياكى ئۆلچەشتە قوغداش پەلەي ۋە كۆزەينەك تاقاش ، ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن ياخشى شامالدىتىش كېرەك.بۇ مەھسۇلات تېرە سەزگۈرلۈك ئىنكاسى ۋە كۆزنىڭ ئېغىر دەرىجىدە غىدىقلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.ئەگەر سۈمۈرۈلسە ، سەزگۈرلۈك ياكى زىققا ئالامەتلىرى ياكى ھەزىم قىلىش ياخشى بولماسلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.نەپەسلىنىشنى غىدىقلاشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.
Assay
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك (U) تۆۋەندىكى شارائىتتا مىنۇتىغا 1 μ mmol تىروزىن ھاسىل قىلىش ئۈچۈن گىدرولىزلاش ئۈچۈن كېرەكلىك ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.
Reagents preparation
رېئاكتىپ I: 1g سۈت قېپى 50 مىللىمېتىر 0.1M ناترىي فوسفات ئېرىتمىسى (pH 8.0) ئېرىتىلگەن ، 65-70 ℃ سۇدا 15 مىنۇت سىڭدۈرۈلگەن ، ئارىلاشتۇرۇلغان ۋە ئېرىتىلگەن ، سۇ بىلەن سوۋۇتۇلغان ، ناترىي ھىدروكسىد pH8.0 غا تەڭشەلگەن ۋە مۇقىملاشتۇرۇلغان. volume 100ml.
ئىككىنچى رېئاكتور: TCA ئېرىتمىسى: 0.1M ترىخلوروئىك كىسلاتا ، 0.2M ناترىي كىسلاتا ، 0.3M كىسلاتا كىسلاتاسى.
Reagent III: 0.4M Na2CO3ھەل قىلىش چارىسى.
تۆتىنچى رېئاكتور: فىنتىن رېئاكتورى ساپ سۇ بىلەن 5 قېتىم سۇيۇلدى.
رېئاكتور V: ئېنزىم سۇيۇقلۇقى: 0.1M ناترىي فوسفات ئېرىتمىسى (pH 8.0).
رېئاكتىپ VI: تىروسىن ئېرىتمىسى: 0 ، 0.005 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.075 ، 0.1 ، 0.25 umol / ml تىروسىن 0.2M HCl بىلەن ئېرىپ كەتتى.
تەرتىپ
1. 0.5ml رېئاكتور مەن 37 to ئالدىن قىزىتىلىدۇ ، 0.5ml فېرمېنت ئېرىتمىسى قوشۇپ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ ، 37 at دە 10 مىنۇتتا قىزىتىمىز.
2. رېئاكسىيە II دىن 1ml نى قوشۇپ ئىنكاسنى توختىتىڭ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە 30 مىنۇت داۋاملاشتۇرۇڭ.
3. مەركەزدىن ئىنكاس قايتۇرۇش ھەل قىلىش چارىسى.
4. 0.5ml خاسىيەتلىك ماددا ئىستېمال قىلىڭ ، 2.5ml رېئاكتېن III ، 0.5ml رېئاكتور IV نى قوشۇڭ ، ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە 37 at دە 30 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ.
5. OD660OD قىلىپ بېكىتىلدى1;قۇرۇق كونترول گۇرۇپپىسى: 0.5ml رېئاكتور V فېرمېنت ئېرىتمىسىنىڭ ئورنىنى ئېلىپ OD نى ئېنىقلاشقا ئىشلىتىلىدۇ660as OD2, ΔOD = OD1-OD2.
6. L- تىروزىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق: 0.5mL ئوخشىمىغان قويۇقلۇق دەرىجىسى L- تىروزىن ئېرىتمىسى ، 2.5mL رېئاكتور III ، 0.5mL رېئاكتور IV660L-tyrosine نىڭ ئوخشىمىغان قويۇقلۇقى ئۈچۈن ، ئاندىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق Y = kX + b غا ئېرىشتى ، بۇ يەردىكى Y بولسا L- تىروسىن قويۇقلۇقى ، X بولسا OD600.
ھېسابلاش
2: رېئاكسىيە ھەل قىلىش ئومۇمىي مىقدارى (mL)
0.5: فېرمېنت ئېرىتمىسىنىڭ مىقدارى (mL)
0.5: خروموگېن بەلگىلەشتە ئىشلىتىلىدىغان رېئاكسىيە سۇيۇقلۇقى (mL)
10: ئىنكاس ۋاقتى (مىنۇت)
Df: كۆپ خىللاشتۇرۇش
C: ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى (mg / mL)
پايدىلانما
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Commun.(1971);44: 513.
3. Hilz, H.et al.,Eur.J. Biochem.(1975);56: 103-108.
4. Sambrook J.et al., مولېكۇلا كلونلاش: تەجرىبىخانا قوللانمىسى ، 2-نەشرى ، سوغۇق بۇلاق پورتى تەجرىبىخانىسى نەشرىياتى ، سوغۇق بۇلاق پورتى (1989).
سان
رەسىم. 1 ئەڭ ياخشى pH
100mM بۇففېر ئېرىتمىسى: pH6.0-8.0 ، Na- فوسفاتpH8.0- 9.0, Tris-HCl;pH9.0-12.5 ، Glycine-NaOH. ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1mg / mL
2-رەسىم
20mM K- فوسفاتلىق بۇففېر pH 8.0 دىكى ئىنكاس.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1mg / mL
رەسىم 3 pH مۇقىملىق
25 ℃ ، 50mM لىق بۇففېر ئېرىتمىسى بىلەن 16 سائەتلىك داۋالاش: pH 4.5-5.5 ، Acetate;pH 6.0-8.0, Na-phosphate;pH 8.0-9.0, Tris-HCl.pH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1mg / mL
4-رەسىم مۇقىملىق
30m-treatment with 50mM Tris-HCl buffer, pH 8.0.ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى: 1mg / mL
5-رەسىم stability at 25 ℃
