ئاقسىل K NGS (پاراشوك)
مۈشۈك نومۇرى: HC4507A
NGS Protease K بولسا فېرمېنتنىڭ ئاكتىپلىقى ۋە كەڭ بەلۋاغنىڭ ئالاھىدىلىكى بولغان تۇراقلىق ئاقسىل بولۇپ ، فېرمېنت ئەڭ ياخشىسى گىدروفوبىك ئامىنو كىسلاتاسىنىڭ C تېرمىنالىغا قوشۇلغان ئېستېر زايومى ۋە پېپتىد باغلىنىشىنى پارچىلايدۇ ، گۈڭگۈرت تەركىبىدىكى ئامىنو كىسلاتا ۋە خۇشپۇراق ئامىنو كىسلاتاسى.شۇڭا ، ئۇ ئاقسىلنى قىسقا پېپتىدقا ئايلاندۇرۇشتا دائىم ئىشلىتىلىدۇ.NGS Protease K بولسا Asp بىلەن تىپىك بولغان ئاقسىل39-His69-سېر224كاتالىزاتورلۇق ئۈچ خىل بولۇپ ، ئۇ ئاقسىلغا خاس بولۇپ ، كاتالىزاتورلۇق مەركىزى سۆرەش Ca بىلەن قورشالغان2+مۇقىملاشتۇرۇش ئۈچۈن تور بېكەتلەرنى باغلاش ، تېخىمۇ كەڭ شارائىتتا يۇقىرى ئېنزىم پائالىيىتىنى ساقلاش.
Specification
| كۆرۈنۈش | ئاق رەڭدىن ئاق رەڭلىك ئامورفوس پاراشوكى ، لىمفىللانغان |
| كونكرېت پائالىيەت | U40U / mg قاتتىق |
| DNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
| RNase | ھېچكىم بايقالمىدى |
| Bioburden | ≤50CFU / g قاتتىق |
| يادرو كىسلاتاسىنىڭ قالدۇقى | <5pg / mg قاتتىق |
خاسلىقى
| مەنبە | Tritirachium album |
| EC نومۇرى | 3.4.21.64(Tritirachium پىلاستىنكىسىدىن قايتا پايدىلىنىش) |
| مولېكۇلا ئېغىرلىقى | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Isoelectric point | 7.81 رەسىم |
| ئەڭ ياخشى pH | 7.0-12.0 (ھەممىسى يۇقىرى پائالىيەتلەرنى قىلىدۇ) 2-رەسىم |
| ئەڭ ياخشى تېمپېراتۇرا | 65 ℃ رەسىم .3 |
| pH مۇقىملىقى | pH 4.5-12.5 (25 ℃, 16h) رەسىم .4 |
| ئىسسىقلىق مۇقىملىقى | 50 (pH 8.0 ، 30min) دىن تۆۋەن |
| ساقلاش مۇقىملىقى | 12 ℃ 12 غىچە 25 at دا ساقلانغان .6 |
| ئاكتىپلىغۇچىلار | SDS ، ئۇرېيە |
| Inhibitor | دىئىزوپروپىل فتوروفوسفاتbenzylsulfonyl فتور |
ساقلاش شەرتلىرى
لىيوفىللانغان پاراشوكنى -25 ~ -15 at دە نۇردىن ئۇزۇن ساقلاڭ.تارقىتىۋېتىلگەندىن كېيىن ، يورۇقلۇقتىن 2-8 at يىراقلىقتا ياكى ئۇزۇن ۋاقىت ساقلاشتا -25 ~ -15 at ئارىلىقىدا قىسقا مۇددەت ساقلاشقا مۇۋاپىق مىقداردا تەقسىم قىلىڭ.
ئالدىنى ئېلىش تەدبىرلىرى
ئىشلەتكەندە ياكى ئۆلچەشتە قوغداش پەلەي ۋە كۆزەينەك تاقاش ، ئىشلىتىپ بولغاندىن كېيىن ياخشى شامالدىتىش كېرەك.بۇ مەھسۇلات تېرە سەزگۈرلۈك ئىنكاسى ۋە كۆزنىڭ ئېغىر دەرىجىدە غىدىقلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.ئەگەر سۈمۈرۈلسە ، سەزگۈرلۈك ياكى زىققا ئالامەتلىرى ياكى ھەزىم قىلىش ياخشى بولماسلىقنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.نەپەسلىنىشنى غىدىقلاشنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
NGS Protease K نىڭ بىر بىرلىكى ئۆلچەملىك ئېنىقلاش شارائىتىدا كاسىننى 1 μ mmol L- تىروزىنغا ھىدرولىزلاش ئۈچۈن كېرەكلىك ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.
Reagents preparation
| Reagent | ئىشلەپچىقارغۇچى | مۇندەرىجە |
| Casein technicalكالا سۈتىدىن | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| Trichloroacetic acid | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| ناترىي كىسلاتاسى | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| كىسلاتا كىسلاتاسى | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| ناترىي كاربونات | Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-phenol | سانگون بىيو تېخنىكا (شاڭخەي)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | سىگما | 93829 |
Reagent I:
سۇ ئاستى سۈتى: كالا سۈتى ئېرىتمىسىدىن% 1 كاسىن: 0.1m ناترىي فوسفات ئېرىتمىسىنىڭ 50 مىللىلىتىردا 1g كالا سۈتى ئېرىتمىسىنى ئېرىتىپ ، pH 8.0 ، سۇ مۇنچىسىدا 65-70 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئىسسىقتا 15 مىنۇت قاينىتىمىز ، ئارىلاشتۇرۇڭ ۋە ئېرىتىمىز ، سۇ بىلەن سوۋۇتۇڭ. ناترىي ھىدروكسىد pH 8.0 دىن 100 مىللىمېتىرغىچە سۇيۇلدۇرۇلىدۇ.
Reagent II:
TCA ئېرىتمىسى: 0.1M ترىخلوروئاسېتىك كىسلاتا ، 0.2M ناترىي كىسلاتاسى ۋە 0.3M كىسلاتا كىسلاتاسى (ئېغىرلىقى 1.64g ترىخلوروئىك كىسلاتا + 1.64g ناترىي كىسلاتاسى + 1.724mL كىسلاتا كىسلاتاسى ئارقا-ئارقىدىن ، 50mL دىئونلانغان سۇنى قوشۇڭ ، HCl بىلەن pH 4.03 گە تەڭشەپ ، سۇيۇلدۇرۇڭ. 100ml).
Reagent III:
0.4m ناترىي كاربونات ئېرىتمىسى (ئېغىرلىقى 4.24g سۇسىز ناترىي كاربونات ۋە 100mL سۇدا ئېرىپ كېتىدۇ)
Reagent IV:
فولىن فېنول رېئاكتورى: دىئونلانغان سۇ بىلەن 5 قېتىم سۇيۇلدۇرۇڭ.
Reagent V:
ئېنزىم سۇيۇقلۇقى: 0.1 M ناترىي فوسفات ئېرىتمىسى ، pH 8.0.
Reagent VI:
L-tyrosine ئۆلچەملىك ئېرىتمىسى: 0 ، 0.005 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.075 ، 0.1 ، 0.25 umol / ml L- تىروسىن 0.2M HCl بىلەن ئېرىپ كەتتى.
تەرتىپ
1. UV-Vis سپېكترو فوتومېتىرنى قوزغىتىپ ، فوتومېتىرلىق ئۆلچەشنى تاللاڭ.
2. دولقۇن ئۇزۇنلۇقىنى 660nm قىلىپ تەڭشەڭ.
3. سۇ مۇنچىسىنى ئېچىڭ ، تېمپېراتۇرىنى 37 set قىلىپ تەڭشەڭ ، تېمپېراتۇرىنىڭ 3-5 مىنۇتقىچە ئۆزگەرمەسلىكىگە كاپالەتلىك قىلىڭ.
4. 37m ℃ سۇ مۇنچىسىدىكى 2mL مەركەزدىن قاچۇرۇش تۇرۇبىسىدا 0.5mL سۇ ئاستى سۈيىنى قىزىتىڭ.
5. 0.5mL سۇيۇقلاندۇرۇلغان ئېنزىم ئېرىتمىسىنى قىزىغان مەركەزدىن ياسالغان نەيچىگە 10 مىنۇت چىقىرىڭ.فېرمېنت سۇيۇقلۇقىنى قۇرۇق گۇرۇپپا قىلىپ تەڭشەڭ.
6. رېئاكسىيەدىن كېيىن دەرھال 1.0 mL TCA رېئاكتورى قوشۇڭ.ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ سۇ مۇنچىسىغا 30 مىنۇت سىڭدۈرۈڭ.
7. مەركەزدىن ئىنكاس قايتۇرۇش ھەل قىلىش چارىسى.
8. كۆرسىتىلگەن تەرتىپ بويىچە تۆۋەندىكى زاپچاسلارنى قوشۇڭ.
| Reagent | ھەجىم |
| خاسىيەتلىك ئادەم | 0.5 mL |
| 0.4M ناترىي كاربونات | 2.5 mL |
| فولىن فېنول رېئاكتورى | 0.5 mL |
9. سۇدا يۇيۇنۇشتىن بۇرۇن 37 ℃ 30 مىنۇت ياخشى ئارىلاشتۇرۇڭ.
10. OD660OD قىلىپ بېكىتىلدى1;قۇرۇق كونترول گۇرۇپپىسى: ئېنزىم سۇيۇقلۇقى فېرمېنت ئېرىتمىسىنىڭ ئورنىنى ئېلىپ OD نى ئېنىقلاشقا ئىشلىتىلىدۇ660as OD2, ΔOD = OD1-OD2.
11. L- تىروزىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق: 0.5mL ئوخشىمىغان قويۇقلۇق دەرىجىسى L- تىروزىن ئېرىتمىسى ، 2.5mL 0.4M ناترىي كاربونات ، 0.5mL فولىن فېنول رېئاكسىيەسى 5mL مەركەزلىك تۇرۇبا يولى ، 37 in 30 مىنۇتتا يوشۇرۇن بولىدۇ.660L-tyrosine نىڭ ئوخشىمىغان قويۇقلۇقى ئۈچۈن ، ئاندىن ئۆلچەملىك ئەگرى سىزىق Y = kX + b غا ئېرىشتى ، بۇ يەردىكى Y بولسا L- تىروسىن قويۇقلۇقى ، X بولسا OD600.
ھېسابلاش
2: رېئاكسىيە ھەل قىلىش ئومۇمىي مىقدارى (mL)
0.5: فېرمېنت ئېرىتمىسىنىڭ مىقدارى (mL)
0.5: خروموگېن بەلگىلەشتە ئىشلىتىلىدىغان رېئاكسىيە سۇيۇقلۇقى (mL)
10: ئىنكاس ۋاقتى (مىنۇت)
Df: كۆپ خىللاشتۇرۇش
C: ئېنزىمنىڭ قويۇقلۇقى (mg / mL)
سان
رەسىم 1 DNA قالدۇقى
| ئۈلگە | Ave C4 | يادرو كىسلاتاسى ئەسلىگە كەلتۈرۈش (pg / mg) | ئەسلىگە كەلتۈرۈش (%) | ئومۇمىي يادرو كىسلاتا ( pg / mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK + STD2 | 18.723 | 126.728 | - | - |
| STD1 | 12.955 |
- |
- |
- |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| RNA-Free H2O | ئېنىق ئەمەس | - | - | - |
رەسىم 2 ئەڭ ياخشى pH
3-رەسىم
رەسىم 4 pH مۇقىملىقى
5-رەسىم
6-رەسىم ساقلاش مۇقىملىقى 25 at
