Robustart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA پولىمېراسى قىزىق باشلىنىش DNA پولىمېراسى.بۇ مەھسۇلات PCR سىستېمىسىنى تەييارلاش ۋە كۈچەيتىش جەريانىدا پىرىمېرلارنىڭ كونكرېت باغلىنىشى ياكى دەسلەپكى يىغىلىشنىڭ كەلتۈرۈپ چىقىرىشىدىن كېلىپ چىققان ئېنىق بولمىغان ئىنكاسنى تېخىمۇ ياخشى چەكلىيەلمەيدۇ.شۇڭلاشقا ، ئۇ ناھايىتى ياخشى ئالاھىدىلىككە ئىگە بولۇپ ، تۆۋەن قويۇقلۇق ئەندىزىسىنى كۈچەيتىشكە تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ، ئۇ كۆپ خىل PCR كۈچەيتىش ئىنكاسىغا ماس كېلىدۇ.ئۇنىڭ ئۈستىگە ، بۇ مەھسۇلاتنىڭ قوللىنىشچانلىقى ئىنتايىن ياخشى ، ئوخشىمىغان تىپتىكى PCR ئىنكاسىدا مۇقىم كۈچەيتىش نەتىجىسىگە ئېرىشكىلى بولىدۇ.

زاپچاسلار

1.5 U / μL Robustart Taq DNA پولىمېراسى

2.10 × PCR Buffer II (Mg² + ھەقسىز) (ئىختىيارى)

3.25 mM MgCl₂(ئىختىيارىي)

* 10 × PCR Buffer II (Mg² + ھەقسىز) دا DNTP ۋە Mg² + يوق ، DNTP ۋە MgCl نى قوشۇڭ.₂ئىنكاس سىستېمىسىنى تەييارلىغاندا.

تەۋسىيە قىلىنغان پروگراممىلار

1.تېز كۈچەيتىش.

2.Multiple amplification.

3.قان ، لۆڭگە ۋە باشقا ئەۋرىشكەلەرنى بىۋاسىتە كۈچەيتىش.

4.نەپەس يولى كېسەللىكلىرىنى بايقاش.

ساقلاش ھالىتى

ئۇزۇن مۇددەت ساقلاش ئۈچۈن -20 ° C ، ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ياخشى ئارىلاشتۇرۇپ ، دائىم مۇزلاشتىن ساقلىنىش كېرەك.

* توڭلاتقۇدىن كېيىن يامغۇر ياغسا ، بۇ نورمال ئەھۋال.ئارىلاشتۇرۇش ۋە ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئۆينىڭ تېمپېراتۇرىسى بىلەن تەڭپۇڭلاشتۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

بىرلىك ئېنىقلىمىسى

بىر ئاكتىپ ئورۇن (U) ئاكتىپلانغان سالمون ئىسپېرمىسى DNA نى قېلىپ / دەسلەپكى قىلىپ ئىشلىتىپ ، 30 سېلسىيە گرادۇسلۇق 10 سېلسىيە گرادۇسلۇق ئوكسىد ئېرىتكۈچى ماددىغا 10 nmol ئوكسىد ئېرىتكۈچى ماددىغا ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.

سۈپەت كونترول

1.SDS-PAGE ئېلېكتروفورېتىك ساپلىقى% 98 تىن يۇقىرى.

2.كۈچەيتىش سەزگۈرلۈكى ، تۈركۈمگە بۆلۈپ كونترول قىلىش ، مۇقىملىق.

3.تاشقى يادرو پائالىيىتى يوق ، تاشقى مەنبەلىك ئىچكى ئاجراتما ياكى بۇلغىنىش بولمايدۇ

كۆرسەتمە

ئىنكاس تەڭشەش

ئىزاھات:

1) a.بۇففېردا DNTP ۋە Mg² + يوق ، dNTP ۋە MgCl نى قوشۇڭ₂ئىنكاس سىستېمىسىنى تەييارلىغاندا.

2) b.ئەگەر qPCR / qRT-PCR ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن بولسا ، رېئاكسىيە سىستېمىسىغا فلۇئورېسسېنسىيە تەكشۈرۈش ئەسۋابى قوشۇشى كېرەك.ئادەتتە ، ئەڭ ئاخىرقى دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2 mMM ياخشى ئۈنۈم بېرىدۇ.ئەگەر رېئاكسىيە ئىقتىدارى ناچار بولسا ، دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2-1 μM ئارىلىقىدا تەڭشىلىدۇ.تەكشۈرۈش ئەسۋابىنىڭ قويۇقلۇقى ئادەتتە 0.1-0.3 mM دائىرىدە ئەلالاشتۇرۇلىدۇ.قويۇقلۇقى تەدرىجىي تەجرىبە ئېلىپ بېرىلىپ ، پىرىمېر بىلەن تەكشۈرۈشنىڭ ئەڭ ياخشى بىرىكمىسىنى تاپقىلى بولىدۇ.

ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت مىنىش كېلىشىمنامىسى

ئىزاھات

1.تېز DNA پولىمېراسىنىڭ كۈچەيتىش نىسبىتى 1 kb / 10 s دىن تۆۋەن بولماسلىقى كېرەك.ئوخشىمىغان PCR ئەسۋابلىرىنىڭ تېمپېراتۇرىنىڭ ئۆرلەش ۋە تۆۋەنلەش نىسبىتى ، تېمپېراتۇرىنى كونترول قىلىش ھالىتى ۋە ئىسسىقلىق ئۆتكۈزۈش ئۈنۈمى ئوخشىمايدۇ ، شۇڭا ئالاھىدە تېز PCR ئەسۋابىنىڭ ئەڭ ياخشى ئىنكاس شارائىتىنى ئەلالاشتۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.

2.بۇ سىستېما ناھايىتى ماسلىشىشچان بولۇپ ، تېخىمۇ يۇقىرى ئېنىقلىق ۋە سەزگۈرلۈككە ئىگە.

3.يۇقىرى سەزگۈرلۈك PCR بايقاش رېئاكتورى سۈپىتىدە ئىشلىتىشكە ماس كېلىدۇ ، كۆپ ئىقتىدارلىق PCR كۈچەيتىش رېئاكسىيەسىدە ئىشلىتىشكە بولىدۇ.

4.5 ′ → 3 ′ پولىمېرازا پائالىيىتى ، 5 ′ → 3 ′ exonuclease پائالىيىتى;no 3 ′ → 5 ′ exonuclease پائالىيىتى;دەلىللەش ئىقتىدارى يوق.

5.PCR ۋە RT-PCR نىڭ سۈپەت ۋە مىقدار سىنىقىغا ماس كېلىدۇ.

6.PCR مەھسۇلاتىنىڭ 3 ′ ئاخىرى A بولۇپ ، ئۇنى بىۋاسىتە T ۋېكتورغا ئايلاندۇرغىلى بولىدۇ.

7.تۆۋەن تېمپېراتۇرا تۆۋەن بولغان پىرىمېرلارغا ياكى 200 bp دىن ئېشىپ كەتكەن پارچىلارنى كېڭەيتىش ئۈچۈن ئۈچ باسقۇچلۇق ئۇسۇل تەۋسىيە قىلىنىدۇ.