Hotstart Taq DNA پولىمېراسى
Hot Start Taq DNA پولىمېراسى (ئانتىتېلانى ئۆزگەرتىش) تېرمۇس سۇ جانلىقلىرى YT-1 from دىن قوزغىلىدىغان ئەڭ ئىسسىق بولغان ئىسسىقلىق پولىمېراسى بولۇپ ، 5 ′ → 3 ′ پولىمېرازا پائالىيىتى ۋە 5´ قاپلاش ئىچكى پائالىيىتى بار.قىزىق قوزغىلىدىغان تاق DNA پولىمېراسى بولسا Taq DNA پولىمېراسى بولۇپ ، تېرموبىل تاك ئانتىتېلاسى تەرىپىدىن ئۆزگەرتىلگەن.ئانتىتېلانى ئۆزگەرتىش PCR نىڭ ئېنىقلىقى ، سەزگۈرلۈكى ۋە مەھسۇلات مىقدارىنى ئاشۇردى.
زاپچاسلار
| زاپچاس | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5 × HC Taq Buffer | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 mL | 5 × 400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (ئانتىتېلا ئۆزگەرتىلگەن) (5 U / μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10 × 5 mL |
قوللىنىشچان پروگراممىلار
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 and 50% Glycerol.
ساقلاش ھالىتى
0 سېلسىيە گرادۇستىن تۆۋەن توشۇش -25 ° C ~ -15 ° C قا ساقلىنىدۇ.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك 15 nmol dNTP نى 30 سېلسىيە گرادۇستا 30 مىنۇت ئىچىدە كىسلاتادا ئېرىمەس ماتېرىيالغا ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.
سۈپەت كونترول
1.Endonuclease Activity:20 μ U ئېنزىمنىڭ 4 μg pUC19 DNA بىلەن 4 سائەت 37 at 37 غىچە سۈمۈرۈلۈشى نەتىجىسىدە گېنى ئېلېكتروفورېز تەرىپىدىن بېكىتىلگەن DNA نىڭ بايقىغىلى بولمايدىغان بۇزۇلۇشى كېلىپ چىقمىدى.
2.5 kb Lambda PCR:25 دەۋرىيلىك PCR نىڭ كۈچەيتىلىشى 5 ng Lambda DNA نىڭ 1.25 بىرلىك Taq DNA پولىمېراسى بىلەن 200 µM dNTPs ۋە 0.2 µM لىق دەسلەپكى قەدەمدە مۆلچەرلەنگەن 5 kb مەھسۇلاتنى بارلىققا كەلتۈرىدۇ.
3.Exonuclease Activity:50 µl رېئاكسىيەنىڭ ئەڭ تۆۋەن بولغاندا 12.5 U لىك Taq DNA پولىمېراسى بار بولۇپ ، 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide بىلەن 30 مىنۇتتا 37 مىنۇتتا 30 reaction ئىنكاسى بايقالمايدۇ.
4.RNase پائالىيىتى:20 µ فېرمېنتنىڭ تەركىبىدە 20 U فېرمېنت بار بولۇپ ، 1 سېلسىيە گرادۇسلۇق RNA خاتىرىسىنى 37 سېلسىيە گرادۇستا 2 سائەت ساقلايدۇ.
5.ئىسسىقلىق ئاكتىپلاش:ياق.
ئىنكاس سىستېمىسى
| زاپچاسلار | ھەجىم |
| قېلىپ DNAa | ئىختىيارىي |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP Mix (ھەر بىرى 10mM) | 0.5 μL |
| 5 × HC Taq Buffer | 5 μL |
| تاق DNA پولىمېراسىb(5U / μL) | 0.125 μL |
| يادروسىز سۇ | 25 μL |
ئىزاھات:
1) a.
| DNA | سومما |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| پلازما ياكى ۋىرۇس | 1 pg-1 ng |
2) b.Taq DNA پولىمېراسىنىڭ ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقى مەخسۇس قوللىنىشچان پروگراممىلاردا 5-50 بىرلىك / mL (0.1-0.5 بىرلىك / 25 µL ئىنكاسى) ئارىلىقىدا بولۇشى مۇمكىن.
ئىسسىقلىق ۋېلىسىپىت مىنىش كېلىشىمنامىسى
PCR
| قەدەم | تېمپېراتۇرا(° C.) | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت |
| دەسلەپكى رەتلەشa | 95 ℃ | 1-3 مىنۇت | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ۋېلىسىپىت |
| Annealingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| كېڭەيتىش | 68 ℃ | 1kb / min | |
| ئاخىرقى كېڭەيتىش | 68 ℃ | 5 مىنۇت | - |
ئىزاھات:
1) 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق 1 مىنۇتلۇق دەسلەپكى ئايرىش كۆپىنچە كۈچەيتكۈچكە يېتىدۇ.قىيىن قېلىپلارغا نىسبەتەن ، 95 سېلسىيە گرادۇستا 2-3 مىنۇت ئۇزۇنراق ئايرىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.مۇستەملىكە PCR بىلەن 95 سېلسىيە گرادۇسلۇق دەسلەپكى 5 مىنۇتلۇق ئايرىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
2) تۇتاشتۇرۇش باسقۇچى ئادەتتە 15-60 s.تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسى دەسلەپكى جۈپلەرنىڭ Tm نى ئاساس قىلغان بولۇپ ، ئادەتتە 45-68 is.
