ياۋا تاق DNA DNA پولىمېراسى
تاق DNA پولىمېراسى تېرمۇس سۇ جانلىقلىرى YT-1 نىڭ ئەڭ ئىسسىق ئۆتكۈزگىلى بولىدىغان DNA پولىمېراسى بولۇپ ، ئۇ 5 ′ → 3 ′ پولىمېرازا پائالىيىتى ۋە 5´ قاپلىق ئىچكى ھەرىكەتنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.
زاپچاسلار
| زاپچاس | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5 × 200 mL |
| تاق DNA پولىمېراسى (5 U / μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5 × 10 mL |
ساقلاش ھالىتى
0 سېلسىيە گرادۇستىن تۆۋەن توشۇش -25 ° C ~ -15 ° C قا ساقلىنىدۇ.
بىرلىك ئېنىقلىمىسى
بىر بىرلىك 15 nmol dNTP نى 30 سېلسىيە گرادۇستا 30 مىنۇت ئىچىدە كىسلاتادا ئېرىمەس ماتېرىيالغا ئۆز ئىچىگە ئالغان ئېنزىمنىڭ مىقدارى دەپ ئېنىقلىما بېرىلگەن.
سۈپەت كونترول
1.ئاقسىلنىڭ ساپلىقى (SDS-PAGE):تاق DNA پولىمېراسىنىڭ ساپلىقى SDS-PAGE تەھلىلى تەرىپىدىن% 95 بېكىتىلدى.
2.Endonuclease Activity:ئەڭ ئاز بولغاندا 5 U Taq DNA پولىمېراسى 1 μg λDNA بىلەن 16 سائەت 37 at دە 16 سائەت ئېنىقلىنىدۇ.
3.Exonuclease Activity:ئەڭ ئاز بولغاندا 5 U Taq DNA پولىمېراسى بىلەن 1 μg λ -Hind Ⅲ ھەزىم قىلىش DNA سى 16 سائەت 37 at دە ھەزىم بولىدۇ.
4.Nickase Activity:ئەڭ ئاز بولغاندا 5 U لىك DNA DNA پولىمېراسى بىلەن 1 mg pBR322 DNA 16 سېلسىيە گرادۇسلۇق ھاۋارايىدا 16 سائەت تۇرغۇزۇلغاندا ، ئېنىقلىغىلى بولىدىغان ناچارلىشىش بولمايدۇ.
5.RNase پائالىيىتى:ئەڭ تۆۋەن بولغاندا 5 U Taq DNA پولىمېراسى 1.6 mgg MS2 RNA بىلەن 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق 16 سائەتتە بېكىتىلگەندەك ئېنىقلىغىلى بولمايدىغان ناچارلىشىشنى كەلتۈرۈپ چىقارمايدۇ.
6.E. coliDNA:5 U Taq DNA پولىمېراسى E. coli 16S rRNA چېكەتكىسىگە خاس بولغان دەسلەپكى TaqMan qPCR ئارقىلىق E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ بار-يوقلۇقى تەكشۈرۈلىدۇ.E. coli گېن گۇرۇپپىسىنىڭ DNA بۇلغىنىشى ≤1 كۆپەيتىلگەن.
7.PCR كۈچەيتكۈچ (5.0 kb لامبدا DNA)- 50 µL رېئاكسىيەسى 5 ng Lambda DNA نى ئۆز ئىچىگە ئالغان 5 بىرلىك Taq DNA Polymerase بىلەن 25 دەۋرىيلىك PCR كېڭەيتىش نەتىجىسى مۆلچەردىكى 5.0 kb مەھسۇلاتتا.
ئىنكاس تەڭشەش
| زاپچاسلار | ھەجىم |
| قېلىپ DNAa | ئىختىيارىي |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (ھەر بىرى 10mM) | 1 μL |
| 10 × Taq Buffer | 5 μL |
| تاق DNA پولىمېراسىb | 0.25 μL |
| يادروسىز سۇ | 50 μL |
ئىزاھات:
1) ئوخشىمىغان قېلىپلارنىڭ ئەڭ ياخشى ئىنكاس قويۇقلۇقى ئوخشىمايدۇ.تۆۋەندىكى جەدۋەلدە 50 µL ئىنكاس سىستېمىسىنىڭ تەۋسىيە قىلىنغان قېلىپ ئىشلىتىلىشى كۆرسىتىلدى.
| DNA | سومما |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| پلازما ياكى ۋىرۇس | 1 pg-1 ng |
2) ئالاھىدە قوللىنىشچان پروگراممىلاردا تاق DNA پولىمېراسىنىڭ ئەڭ ياخشى قويۇقلۇقى 0.25 µL ~ 1 µL ئارىلىقىدا بولۇشى مۇمكىن.
ئىنكاسپروگرامما
| قەدەم | تېمپېراتۇرا(° C.) | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت |
| دەسلەپكى رەتلەشa | 95 ℃ | 5 مىنۇت | - |
| Denaturation | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ۋېلىسىپىت |
| Annealingb | 60 ℃ | 15 s | |
| كېڭەيتىش | 72 ℃ | 1kb / min | |
| ئاخىرقى كېڭەيتىش | 72 ℃ | 5 مىنۇت | - |
ئىزاھات:
1) دەسلەپكى ئايرىش ھالىتى كۆپىنچە كۈچەيتمە ئىنكاسلارغا ماس كېلىدۇ ، قېلىپ قۇرۇلمىسىنىڭ مۇرەككەپلىكىگە ئاساسەن ئۆزگەرتىشكە بولىدۇ.ئەگەر قېلىپ قۇرۇلمىسى مۇرەككەپ بولسا ، دەسلەپكى ئايرىش ۋاقتىنى 5 - 10 مىنۇتقىچە ئۇزارتىپ ، دەسلەپكى ئايرىش ئۈنۈمىنى ئۆستۈرگىلى بولىدۇ.
2) تۇتاشتۇرۇش تېمپېراتۇرىسىنى دەسلەپكى كۆرسەتكۈچنىڭ Tm قىممىتىگە ئاساسەن تەڭشەش كېرەك ، بۇ ئادەتتە قەغەزنىڭ Tm قىممىتىدىن 3 ~ 5 ℃ تۆۋەن بولىدۇ.مۇرەككەپ قېلىپلارغا نىسبەتەن ، قوشۇمچە تېمپېراتۇرىنى تەڭشەش ۋە ئۇزارتىش ۋاقتىنى ئۇزارتىپ ، ئۈنۈملۈك كۈچەيتىشنى ئەمەلگە ئاشۇرۇش كېرەك.
