Universal SYBR GREEN qPCR Premix (كۆك)
مۈشۈك نومۇرى: HCB5041B
ھەممىباب كۆك qPCR Master Mix (بوياقنى ئاساس قىلغان) يۇقىرى سەزگۈرلۈك ۋە خاسلىق بىلەن ئىپادىلىنىدىغان 2 × ھەقىقىي مىقداردىكى PCR كۈچەيتكۈچنىڭ ئالدىن ھەل قىلىش چارىسى بولۇپ ، كۆك رەڭدە بولۇپ ، ئەۋرىشكە قوشۇشنىڭ رولى بار.يادرولۇق تەركىب Taq DNA پولىمېراسى ئانتىتېلا قىزىق قوزغىلىش ئارقىلىق ئەۋرىشكە تەييارلاش جەريانىدا دەسلەپكى قەدەمدە قېتىشىش سەۋەبىدىن ئالاھىدە بولمىغان كۈچەيتىشنى ئۈنۈملۈك چەكلەيدۇ.شۇنىڭ بىلەن بىر ۋاقىتتا ، بۇ فورمۇلا ئىلگىرى سۈرۈش ئامىللىرىنى قوشۇپ ، PCR ئىنكاسىنىڭ كۈچەيتىش ئۈنۈمىنى ئۆستۈرۈپ ، ئوخشىمىغان GC مەزمۇنى (30 ~ 70%) بىلەن گېننىڭ كۈچەيتىلىشىنى تەڭلەشتۈرىدۇ ، بۇنداق بولغاندا مىقدارلاشقان PCR كەڭ كۆلەمدە ياخشى سىزىقلىق مۇناسىۋەتكە ئېرىشەلەيدۇ. رايون.بۇ مەھسۇلات ئالاھىدە ROX پاسسىپ پايدىلىنىش بوياقنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بولۇپ ، كۆپىنچە qPCR ئەسۋابلىرىغا ماس كېلىدۇ.ئوخشىمىغان ئەسۋابلاردىكى ROX نىڭ قويۇقلۇقىنى تەڭشەش ھاجەتسىز.كۈچەيتمە ئىنكاس سىستېمىسىنى تەييارلاش ئۈچۈن پەقەت دەسلەپكى ۋە قېلىپلارنى قوشۇش كېرەك.
زاپچاسلار
Universal Blue qPCR Master Mix
ساقلاش شارائىتى
بۇ مەھسۇلات مۇز خالتىسى بىلەن توشۇلغان بولۇپ ، -25 ℃ ~ -15 at 18 ئاي ساقلىغىلى بولىدۇ.ئىنكاس سىستېمىسىنى ساقلىغاندا ياكى تەييارلىغاندا كۈچلۈك نۇرنىڭ نۇرلىنىشىدىن ساقلىنىش كېرەك.
Specification
| مەركەزلىشىش | 2 × |
| بايقاش ئۇسۇلى | SYBR |
| PCR ئۇسۇلى | qPCR |
| Polymerase | تاق DNA پولىمېراسى |
| ئەۋرىشكە تىپى | DNA |
| قوللىنىشچان ئۈسكۈنىلەر | كۆپىنچە qPCR قوراللىرى |
| مەھسۇلات تىپى | ئەمەلىي ۋاقىتتىكى فلۇئورېسېنسىيىلىك مىقدار PCR ئۈچۈن SYBR ئالدىن تاللاش |
| ئىلتىماس قىلىڭ | Gene Expression |
كۆرسەتمە
1. رېئاكسىيە سىستېمىسى
| زاپچاسلار | Volome (μL） | Volome (μL） | Final Concentration |
| Universal SYBR GREEN qPCR Premix | 25 | 10 | 1 × |
| ئالدىدىكى Primer (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol / L. |
| تەتۈر پىرىمېر (10μmol / L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol / L. |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | up to 50 | to 20 | - |
[ئەسكەرتىش]: ئىشلىتىشتىن بۇرۇن ئوبدان ئارىلاشتۇرۇڭ ، كۆپۈك كۆپۈكنىڭ كۈچلۈك تەۋرىنىشىدىن ساقلىنىڭ.
a) دەسلەپكى قويۇقلۇقى: ئەڭ ئاخىرقى دەسلەپكى قويۇقلۇقى 0.2 mmol / L ، شۇنداقلا مۇۋاپىق بولغاندا 0.1 دىن 1.0μmol / L ئارىلىقىدا تەڭشىگىلى بولىدۇ.
b) قېلىپنىڭ قويۇقلۇقى: ئەگەر قېلىپ ئېنىقلانمىغان cDNA پاي ھەل قىلىش چارىسى بولسا ، ئىشلىتىلگەن ھەجىم qPCR ئىنكاسىنىڭ ئومۇمىي ھەجىمىنىڭ 1/10 دىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك.
c) قېلىپنى سۇيۇلدۇرۇش: cDNA پاي ھەل قىلىش چارىسىنى 5-10 قېتىم سۇيۇلدۇرۇش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.كۆپەيتىش ئارقىلىق ئېرىشكەن Ct قىممىتى 20-30 دەۋرىيلىك بولغاندا قوشۇلغان قېلىپنىڭ ئەڭ ياخشى مىقدارى تېخىمۇ ياخشى.
d) رېئاكسىيە سىستېمىسى: 20μL ياكى 50μL ئىشلىتىپ ، گېننىڭ كۈچەيتىلىشىنىڭ ئۈنۈمى ۋە تەكرارلىنىشىغا كاپالەتلىك قىلىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.
e) سىستېما تەييارلاش: دەرىجىدىن تاشقىرى پاكىز ئورۇندۇقتا تەييارلىق قىلىپ ، يادرو قالدۇقى بولمىغان كۆرسەتمە ۋە ئىنكاس نەيچىسىنى ئىشلىتىڭ.كۆرسەتمىلەرنى سۈزگۈچ كارىدور بىلەن ئىشلىتىش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.كرېستتىن بۇلغىنىش ۋە ئايروسولدىن بۇلغىنىشتىن ساقلىنىڭ.
2.ئىنكاس پروگراممىسى
ئۆلچەملىك پروگرامما
| دەۋرىيلىك قەدەم | Temp. | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت |
| دەسلەپكى رەتلەش | 95 ℃ | 2 min | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 10 سېكۇنت | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 30 سېكۇنت ★ | |
| ئەگرى سىزىق | ئەسۋاب كۆڭۈلدىكى قىممىتى | 1 | |
تېز پروگرامما
| دەۋرىيلىك قەدەم | Temp. | ۋاقىت | ۋېلىسىپىت |
| دەسلەپكى رەتلەش | 95 ℃ | 30 سېكۇنت | 1 |
| Denaturation | 95 ℃ | 3 سېكۇنت | 40 |
| Annealing / Extension | 60 ℃ | 20 سېكۇنت ★ | |
| ئەگرى سىزىق | ئەسۋاب كۆڭۈلدىكى قىممىتى | 1 | |
[ئەسكەرتىش]: تېز پروگرامما مۇتلەق كۆپ ساندىكى گېنلارغا ماس كېلىدۇ ، ئۆلچەملىك پروگراممىلارنى يەككە مۇرەككەپ ئىككىلەمچى قۇرۇلما گېنى ئۈچۈن سىناق قىلىشقا بولىدۇ.
a) تېمپېراتۇرا ۋە ۋاقىت: دەسلەپكى ۋە نىشان گېننىڭ ئۇزۇنلۇقىغا ئاساسەن تەڭشەڭ.
b) فلۇئورېسسېنسىيە سىگنالىغا ئېرىشىش (★): قورالنى ئىشلىتىش كۆرسەتمىسىدىكى تەلەپكە ئاساسەن تەجرىبە تەرتىپىنى بېكىتىڭ.
c) ئېرىتىش ئەگرى سىزىقى: قورالنىڭ سۈكۈتتىكى پروگراممىسىنى نورمال ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
3. نەتىجىنى تەھلىل قىلىش
مىقدار تەجرىبىسى ئۈچۈن كەم دېگەندە ئۈچ خىل بىئولوگىيىلىك كۆپەيتىش تەلەپ قىلىندى.ئىنكاستىن كېيىن ، كۈچەيتىش ئەگرى سىزىقى ۋە ئېرىتىش ئەگرى سىزىقىنى جەزملەشتۈرۈش كېرەك.
3.1 كۈچەيتمە ئەگرى سىزىق:
ئۆلچەملىك كۈچەيتىش ئەگرى سىزىقى S شەكىللىك.مىقدار ئانالىزى Ct قىممىتى 20 دىن 30 گىچە بولغاندا ئەڭ توغرا بولىدۇ. ئەگەر Ct قىممىتى 10 دىن تۆۋەن بولسا ، قېلىپنى سۇسلاشتۇرۇپ ، قايتا سىناق قىلىش كېرەك.Ct قىممىتى 30-35 ئارىلىقىدا بولغاندا ، قېلىپنىڭ قويۇقلۇقى ياكى ئىنكاس سىستېمىسىنىڭ ئاۋازىنى ئاشۇرۇش كېرەك ، بۇنداق بولغاندا كېڭەيتىش ئۈنۈمىنى ئۆستۈرۈپ ، نەتىجىنى تەھلىل قىلىشنىڭ توغرىلىقىغا كاپالەتلىك قىلىش كېرەك.Ct قىممىتى 35 تىن يۇقىرى بولغاندا ، سىناق نەتىجىسى گېننىڭ ئىپادىسىنى مىقدارلاشتۇرۇپ تەھلىل قىلالمايدۇ ، ئەمما سۈپەت ئانالىزىغا ئىشلىتىشكە بولىدۇ.
3.2 ئېرىتىش ئەگرى سىزىقى:
ئېرىتىش ئەگرى سىزىقىنىڭ يەككە چوققىسى ئىنكاسنىڭ ياخشىلىقىنى ۋە مىقدار ئانالىزىنىڭ ئېلىپ بېرىلىدىغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ.ئەگەر ئېرىتىش ئەگرى سىزىقى قوش ياكى كۆپ چوققىلارنى كۆرسەتسە ، مىقدار ئانالىزى ئېلىپ بارغىلى بولمايدۇ.ئېرىتىش ئەگرى سىزىقى قوش چوققا نۇقتىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ، نىشانسىز چوققانىڭ دەسلەپكى ۋاقىت سىزىقى ياكى DNA ئاگاروزا گېلى ئېلېكتروفورىسى ئارقىلىق ئالاھىدە كۈچەيتمىگەنلىكىگە ھۆكۈم قىلىش كېرەك.ئەگەر ئۇ دەسلەپكى ۋاقىت ئۆلچىمى بولسا ، دەسلەپكى قويۇقلۇقىنى تۆۋەنلىتىش ياكى يۇقىرى كۈچەيتكۈچ ئۈنۈمى بىلەن پىرىسنى قايتىدىن لايىھىلەش تەۋسىيە قىلىنىدۇ.ئەگەر ئۇ ئالاھىدە كۈچەيتىلمىگەن بولسا ، قوشۇمچە تېمپېراتۇرىنى ئۆرلىتىڭ ياكى پىرىمېرلارنى كونكرېت قىلىپ قايتا لايىھىلەڭ.
ئىزاھات
سالامەتلىكىڭىز ۋە بىخەتەرلىكىڭىزگە كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن كېرەكلىك PPE ، تەجرىبىخانا چاپان ۋە پەلەي كىيىڭ.
بۇ مەھسۇلات ONLY تەتقىقاتى ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ
